背景及概述[1-2]
誘惑紅是食用色素的一種，呈鮮艷的深紅色，單色品種。該色素穩(wěn) 定性優(yōu)良，被廣泛用于食品、飲料、藥品、化妝品、飼料、煙草、玩具、 食品包裝材料等的著色。水溶性合成色素，鮮艷的深紅色，應(yīng)用于糖果 包衣、冰淇淋、雪糕、糖果、糕點、飲料等的著色。
誘惑紅為深紅色均勻粉末，無臭。溶于水，可溶于甘油和丙二醇，微溶于乙醇，不溶于油脂。溶于水呈微帶黃色的紅色溶液。耐光、耐熱性強，耐堿及耐氧化還原性差。性質(zhì)類似于其他重氮型紅色素。對含二氧化硫或氫離子(pH≥3)的水溶液耐受性佳。著色牢度強。溶于水，中性和酸性水溶液呈紅色，堿性呈暗紅色。
誘惑紅為水溶性合成色素，呈鮮艷的深紅色，廣泛應(yīng)用于糖果包衣、冰淇淋、雪糕、糖果、糕點、飲料等的著色。我國《食品添加劑使用衛(wèi)生標準》(GB 2760?1996)規(guī)定：用于糖果包衣時使用量為0.085g/kg，用于冰淇淋時使用量為0.07g/kg，用于炸雞調(diào)料時使用量為0.4g/kg。
標準物質(zhì)制備[3]
稱取食品添加劑級誘惑紅樣品(來自上海染料研究所)2.15g，加入 40ml去離子水，配制成約0.05g/ml的誘惑紅水溶液。稱取100g Sephadex LH?20凝膠，加入300ml色譜級甲醇溶脹15min，待凝膠充分溶脹后進行 裝柱(約2米長)，并用去離子水和色譜級甲醇交替清洗凝膠，重復(fù)3次。
將配制好的誘惑紅水溶液進行上樣，以去離子水作為流動相進行凝膠 過濾色譜分離，控制色譜柱的溫度為20℃，調(diào)節(jié)流動相的流速為3ml/min， 每個流分接液50ml，將所接流分均進行密封避光保存。
對所有流分進行HPLC檢測，其中檢測條件為：色譜柱：GRACE Apollo C18(250mm×4.6mm 5μm)；流動相：甲醇/0.08M乙酸銨水溶液 (30/70)；流速：1.0ml/min；檢測波長：254nm和540nm；柱溫：40℃； 進樣量：5μl。發(fā)明人意外地發(fā)現(xiàn)，其中第6流分含有純度達到99％以上 的誘惑紅，經(jīng)真空冷凍干燥機進行冷凍干燥，得到純度為99％以上的干 燥誘惑紅標準物質(zhì)。
對于含有較低純度誘惑紅的其它流分，還可以 通過再次進行上述凝膠過濾色譜得到進一步純化，從而獲得更多的純度為 99％以上的誘惑紅。
含量檢測[4]
(1)聚磺基水楊酸-三聯(lián)吡啶釕修飾的玻碳電極的制備
將玻碳電極置于含1.0×10-2mol/L磺基水楊酸與1.0×10-4mol/L三聯(lián)吡啶釕的水溶液中，采用循環(huán)伏安法進行電聚合，在-1.5～+2.0V的電位范圍內(nèi)，掃速0.1V/s，掃描10～30圈，取出晾干后得到修飾電極。
(2)標準曲線的繪制
將步驟(1)制備的修飾電極作為工作電極，飽和甘汞電極作為參比電極，鉑電極作為輔助電極，組成三電極體系，并以pH＝10的0.1mol/L PBS緩沖液為空白溶液檢測發(fā)光強度，將該三電極體系置于含有不同濃度誘惑紅(1.0×10-7mol/L，5.0×10-7mol/L，1.0×10-6mol/L，5.0×10-6mol/L，1.0×10-5mol/L，5.0×10-5mol/L和1.0×104mol/L)pH＝10的PBS緩沖溶液中，在0.1V到1.5V的電位范圍內(nèi)進行循環(huán)伏安法掃描，光電倍增管電壓為800V，在此條件下，記錄E-ECL曲線，并讀出發(fā)光強度峰值。所得數(shù)據(jù)經(jīng)統(tǒng)計后，以誘惑紅的濃度為橫坐標，空白溶液和誘惑紅的發(fā)光強度差值為縱坐標，繪制標準曲線，進而獲得相應(yīng)的線性回歸方程。上述方程的線性范圍為1.0×10-7～1.0×10-4mol/L，根據(jù)本發(fā)明所用玻碳電極的直徑為3mm，檢測限為0.6×10-7mol/L。
(3)樣品的檢測
選取市售的西瓜飲料試樣1.0mL置于100mL容量瓶中，用pH＝10的0.1mol/L PBS緩沖溶液定容至100mL，取20mL所得溶液用于電化學(xué)發(fā)光檢測，按照與步驟(2)相同的電化學(xué)測試方法對待測樣品溶液進行測試，以獲得ECL發(fā)光強度值及其與空白溶液發(fā)光強度值差值，所得發(fā)光強度值差值用步驟(2)所得標準曲線所對應(yīng)的線性回歸方程計算出待檢測樣品中誘惑紅的濃度。
參考文獻
[1] 誘惑紅產(chǎn)品介紹
[2] [中國發(fā)明] CN201110035545.2 用于檢測誘惑紅的方法及酶聯(lián)免疫試劑盒
[3] [中國發(fā)明,中國發(fā)明授權(quán)] CN201010541188.2 一種誘惑紅標準物質(zhì)及其制備和應(yīng)用
[4] [中國發(fā)明,中國發(fā)明授權(quán)] CN201611027826.2 一種固定三聯(lián)吡啶釕及電化學(xué)發(fā)光檢測誘惑紅的方法