介紹

固紫 B的分子式為(C15H14N3O2)2·ZnCl4，外觀為黃色結(jié)晶性粉末，可溶于極性及非極性溶劑。分子結(jié)構(gòu)中含有三個偶氮基團（-N=N-），這些基團是染料的發(fā)色團，負責吸收特定波長的光，從而賦予染料顏色的特性。兩個固紫 B分子通過鋅離子（Zn2+）形成絡合物，鋅離子與四個氯離子（Cl?）配位，形成穩(wěn)定的結(jié)構(gòu)。

固紫 B

應用

固紫 B作為一種偶氮染料，在生物醫(yī)學領域有著重要的應用，尤其是在細胞化學染色方面。本文將詳細闡述其在骨髓基質(zhì)細胞（BMSC）染色中的應用，以及其在臨床診斷中的價值。

染色法的建立

固紫 B染色法的建立是為了更好地識別和計數(shù)骨髓基質(zhì)細胞（BMSC）。BMSC是一類具有高度增殖、自我更新及多向分化潛能的細胞，在細胞與基因治療中有著廣闊的應用前景。然而，BMSC在骨髓中的含量非常少，每(0.1—1.0)×10^6個有核細胞中僅有1個基質(zhì)細胞，傳統(tǒng)的Wright-Giemsa染色后其形態(tài)不夠顯目，難以準確識別。為了克服這一問題，研究者們建立了固紫B鹽細胞化學染色法。該方法通過優(yōu)化固定液種類、固定時間、pH值、染色時間及緩沖液等參數(shù)，最終確定了使用pH 7.2—7.6的PBS緩沖液進行染色，使BMSC胞質(zhì)染成紫紅色，而胞核不著色，其他細胞（如粒細胞、紅細胞、巨核細胞、單核細胞、巨噬細胞、淋巴細胞、漿細胞、間皮細胞等）均不染色。

染色操作步驟

第一步標本采集：吸取患者骨髓、胸腔積液或腹腔積液50μl制成涂片。健康對照者骨髓液2ml，采用Percoll密度梯度分離法分離并培養(yǎng)BMSC，細胞按1:3比例傳代，傳代培養(yǎng)4代后用胰酶消化，洗滌，得單個核細胞懸液，約3×10^6/ml，室溫下560×g離心5min，棄上清液，細胞沉淀混勻，推片。

第二步固定：將新鮮干燥標本于固定液（95%乙醇溶液345ml，40%甲醛溶液55ml，蒸餾水10ml混合而成）固定30s，小水流沖洗后晾干。

第三步染色：將固定后的標本置入1g/L固紫 B的PBS溶液（pH 7.2—7.6），37℃水浴箱內(nèi)置30min，流水沖洗1min，晾干后蘇木精復染2min，流水沖洗，待干。

第四步鏡下觀察：在顯微鏡下觀察細胞的著色情況及陽性BMSC形態(tài)特征，并計數(shù)貧血組、健康對照組和隨機雙盲法選取的150份骨髓標本全片的BMSC陽性數(shù)。

臨床應用價值

研究發(fā)現(xiàn)，AA組BMSC計數(shù)為(1.07±0.29)個，增生性貧血組為(2.26±0.37)個，健康對照組為(1.58±0.33)個，AA組BMSC計數(shù)明顯低于增生性貧血組和健康對照組（q值分別為24.29、8.83，P均<0.01），健康對照組低于增生性貧血組（q=16.41，P<0.01）。以健康對照組BMSC數(shù)的下限值作為AA的診斷界點，該方法診斷AA的敏感度為90%，特異度為93%，陽性似然比為12.86，陰性似然比為0.11。在一般的貧血患者中，BMSC數(shù)與骨髓增生程度有關，造血旺盛型BMSC數(shù)多于造血減低型。固紫 B染色法可以快速、準確地計數(shù)BMSC，從而評估骨髓的增生程度，對貧血的鑒別診斷具有重要的臨床價值。

固紫B染色法的優(yōu)勢

整個操作過程僅需30分鐘，染色明顯，對陳舊標本也易著色，染色液配置后可較長時間保存，染色結(jié)果保留數(shù)月也不褪色。固紫 B染色后BMSC胞核不著色，胞質(zhì)豐富，呈紫紅色，而其他細胞均無此染色特征。與經(jīng)典的流式細胞儀分析法比較發(fā)現(xiàn)，流式細胞儀法分類具有CD105/CD106/CD146細胞表面標記特征的細胞，固紫 B染色也呈陽性，表明它對BMSC染色具有較高的特異性。與流式細胞儀分析法、免疫細胞化學染色、熒光標記法等相比，固紫 B染色法成本低廉，易于在基層醫(yī)院推廣[1]。

參考文獻

[1]GONG XU-BO,吳先國,盧興國,等. 骨髓基質(zhì)細胞固紫B鹽染色法的建立及其臨床意義[J]. 中華檢驗醫(yī)學雜志,2008,31(8):890-893.