背景^[1-6]

STAT1 alpha Rabbit Monoclonal Antibody（STAT1α家兔單克隆抗體）是用STAT1抗原對家兔進(jìn)行免疫后篩選出只產(chǎn)生的STAT1抗體的B淋巴細(xì)胞，再將B細(xì)胞通過細(xì)胞融合技術(shù)與骨髓瘤雜交然后篩選出只分泌STAT1抗體的雜交細(xì)胞，最后通過層析柱純化制的高純度的STAT1抗體兔單克隆抗體。STAT（Signal transducers and activators of transcription）(信號傳導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄激活因子),含有SH2和SH3結(jié)構(gòu)域，可與特定的含磷酸化酪氨酸的肽段結(jié)合。

當(dāng)STAT被磷酸化后，發(fā)生聚合成為同源或異源二聚體形式的活化的轉(zhuǎn)錄激活因子，進(jìn)入胞核內(nèi)與靶基因啟動子序列的特定位點結(jié)合，促進(jìn)其轉(zhuǎn)錄。已克隆成功4種JAK(JAK13和Tyk2)與7種STAT(STAT1，STAT2，STAT3，STAT4，STAT5a，STAT5b，STAT6)。

STAT1膜受體信號通過各種配體，包括干擾素和生長激素，如EGF，誘導(dǎo)激活JAK激酶，然后導(dǎo)致酪氨酸磷酸化的各種轉(zhuǎn)錄因子的統(tǒng)計。Stat1和Stat2 IFN-α和形成的異質(zhì)二聚體ISGF3轉(zhuǎn)錄因子復(fù)雜的一部分。雖然早期報告顯示Stat3激活通過EGF和il-6,它已經(jīng)表明,Stat3β似乎都被激活而Stat3α是由表皮生長因子激活的,但不是由il-6。Stat4的最高表達(dá)見于睪丸和髓樣細(xì)胞。IL-12被認(rèn)為是Stat4的激活因子。Stat5被催乳素和IL-3激活。Stat6參與IL-4激活的信號通路。

STAT1同源二聚體參與Ⅱ型干擾素（Interferon-gamma）引發(fā)的信號通路，進(jìn)入細(xì)胞核后會結(jié)合到啟動子上的干擾素γ激活序列（Interferon-gamma activated sequence，GAS），激活I(lǐng)FN誘導(dǎo)的早期基因表達(dá)。在Ⅰ型干擾素（interferon alpha/beta）激活的信號通路，STAT1-STAT2異源二聚體與IRF9（interferon response factor 9）結(jié)合形成ISGF3（interferon stimulated gene factor 3）復(fù)合物，并結(jié)合到啟動子的ISRE結(jié)合區(qū)，誘導(dǎo)下游基因表達(dá)。IFNγ是唯一一種II型干擾素，主要由活化的T淋巴細(xì)胞和自然殺傷細(xì)胞產(chǎn)生，具有抗病毒、免疫監(jiān)視、免疫調(diào)節(jié)及抗腫瘤等特性。

IFNγ的生物學(xué)活性依賴于細(xì)胞內(nèi)分子信號轉(zhuǎn)導(dǎo)網(wǎng)絡(luò)的激活，目前JAK-STAT信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路最為廣泛研究和認(rèn)可。首先IFNγ與細(xì)胞表面的IFNγ受體(IFNGR1和IFNGR2)相結(jié)合，使得胞內(nèi)與IFNGR2相連JAK2激酶發(fā)生自磷酸化，激活的JAK2磷酸化JAK1激酶，接著JAK1磷酸化IFNGR1440位酪氨酸，使其產(chǎn)生STAT1蛋白的錨定位點，被募集的STAT1蛋白701位酪氨酸被磷酸化，目前認(rèn)為可能是被JAK2介導(dǎo)，同時STAT1Ser727在IFNγ信號轉(zhuǎn)導(dǎo)中也會被磷酸化，活化的STAT1蛋白形成同源二聚體，與受體解聚，進(jìn)入細(xì)胞核內(nèi)，結(jié)合含有g(shù)amma激活序列(GAS)的基因啟動子，啟動IFNγ效應(yīng)基因的表達(dá)，從而發(fā)揮其抗病毒生物學(xué)活性。

應(yīng)用^[7][8]

STAT1α家兔單克隆抗體可用于c-Abl通過磷酸化STAT1調(diào)控IFNγ應(yīng)答途徑研究：

非受體酪氨酸激酶c-abl基因位于人的第9號染色體，是Abelson小鼠白血病病毒原癌基因v-abl在細(xì)胞內(nèi)的同源基因，編碼蛋白分子量約為140kDa。c-Abl定位于多種亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)中，能夠被多種應(yīng)激信號活化，通過其酪氨酸激酶活性參與調(diào)控細(xì)胞增殖、骨架重塑、細(xì)胞黏附、氧化和DNA損傷應(yīng)激、細(xì)胞凋亡、細(xì)胞轉(zhuǎn)化以及細(xì)胞遷移等生命活動，發(fā)揮重要的生理功能。

首先利用熒光定量PCR驗證轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)，結(jié)果顯示c-Abl敲低細(xì)胞中免疫蛋白酶體誘導(dǎo)亞基Lmp2和調(diào)節(jié)亞基PA28α的IFNγ誘導(dǎo)轉(zhuǎn)錄水平低于野生型細(xì)胞，并且抗原提呈相關(guān)轉(zhuǎn)運體Tap1本底轉(zhuǎn)錄水平也出現(xiàn)下調(diào)。Lmp2和Tap1基因共用一個雙向轉(zhuǎn)錄啟動子，而且兩個基因的轉(zhuǎn)錄均受到IFNγ調(diào)控，因此我們構(gòu)建Lmp2轉(zhuǎn)錄啟動子熒光素酶報告系統(tǒng)，突變其中已知轉(zhuǎn)錄調(diào)控序列，結(jié)果顯示，c-Abl是通過GAS序列調(diào)控Lmp2基因轉(zhuǎn)錄。

GAS轉(zhuǎn)錄活性由IFNγ經(jīng)典信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路JAK-STAT1中的關(guān)鍵因子STAT1調(diào)控，因此，提示我們c-Abl可能通過調(diào)控STAT1蛋白影響IFNγ效應(yīng)基因表達(dá)。利用免疫共沉淀方法證明細(xì)胞內(nèi)源性和過表達(dá)c-Abl與STAT1能夠形成免疫復(fù)合物，GST-pull down和Far Western結(jié)果表明c-Abl與STAT1是直接相互作用，而且c-Abl通過其SH2結(jié)構(gòu)域與STAT1C端結(jié)合，利用細(xì)胞原位檢測蛋白質(zhì)相互作用的技術(shù)Duo-Link發(fā)現(xiàn)IFNγ能夠增強(qiáng)c-Abl與STAT1的相互作用，并且具有IFNγ劑量依賴性。

進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，IFNγ誘導(dǎo)c-Abl缺陷細(xì)胞中STAT1已知關(guān)鍵氨基酸位點Tyr701和Ser727磷酸化水平顯著弱于野生型細(xì)胞，這兩個位點的磷酸化修飾對于STAT1蛋白的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活活性至關(guān)重要；通過過表達(dá)和體外激酶分析證明c-Abl能夠特異性磷酸化STAT1，并且質(zhì)譜數(shù)據(jù)結(jié)果表明c-Abl介導(dǎo)STAT1Tyr701磷酸化；利用JAK2缺陷型細(xì)胞和JAK1/2激酶抑制劑證明c-Abl磷酸化STAT1不依賴于JAK激酶，并且c-Abl能夠促進(jìn)STAT1蛋白表達(dá)水平，調(diào)控其同源二聚體的形成及進(jìn)入細(xì)胞核。

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