齊-尼氏抗酸染色法是在加熱條件下使分枝菌酸與石炭酸復(fù)紅牢固結(jié)合成復(fù)合物,用鹽酸酒精處理也不脫色。當(dāng)再加堿性美蘭復(fù)染后,分枝桿菌仍然為紅色,而其他細(xì)菌及背景中的物質(zhì)為藍(lán)色。
抗酸菌細(xì)胞壁富含蠟與脂質(zhì)導(dǎo)致染色效率低,過去需要加熱石炭酸溶液加速細(xì)胞壁形成復(fù)合物,現(xiàn)代采用特殊工藝配制,不需要進(jìn)行加熱即可完成染色。抗酸菌細(xì)胞壁被品紅染料染色后幾乎不可能被脫色,即使使用鹽酸化乙醇脫色液也無法脫色。利用抗酸菌的這個特點,可以在顯微鏡下與非抗酸菌進(jìn)行區(qū)分。
孔雀石綠溶液可用作生物染色劑,也用作絲綢、皮革和紙張的染料。商品孔雀石綠染料,是將色素溶于熱草酸溶液冷卻后得草酸鹽的結(jié)晶,2C23H24N2.C2H2O4?;蛴名}酸中和后,加定量的氯化鋅ZnCl2結(jié)晶出氯化鋅復(fù)鹽3C23H25N2CL.2ZnCl2,成為綠色堿性染料,把細(xì)菌或細(xì)胞組織染成藍(lán)綠色,方便在顯微鏡下研究。
目前國內(nèi)市場沒有抗酸染色液復(fù)染用孔雀石綠復(fù)染,經(jīng)染色對比用孔雀石綠溶液復(fù)染后抗酸染色陰性菌呈藍(lán)綠色,背景更清晰,優(yōu)勢明顯。
配制方法
一種孔雀石綠溶液的配制方法,其特征在于:所述孔雀石綠溶液的配制方法具體實施步驟如下:
A、稱取孔雀石綠(草酸鹽)6g溶于100ml 95%乙醇中;
B、加入純化水850ml攪拌均勻;
C、用普通濾紙過濾;
D、加入甘油50ml攪拌均勻灌裝黑色或棕色瓶中備用。
使用方法
一種孔雀石綠溶液的使用方法,其特征在于:所述孔雀石綠溶液抗酸染色方法步驟如下:
A、固定后的涂片放置于玻片架上;
B、加石炭酸品紅溶液染色,試劑完全覆蓋樣本并停留5分鐘,流動自來水沖洗直到?jīng)]有云霧狀染劑出現(xiàn),瀝去標(biāo)本上剩余的水;
C、加鹽酸乙醇溶液脫色,試劑完全覆蓋樣本并停留15~30秒(視標(biāo)本厚度決定),流動自來水立即沖洗,瀝去標(biāo)本上剩余的水;
D、加孔雀石綠溶液染色,試劑完全覆蓋樣本并停留1分鐘,流動自來水立即沖洗,瀝去標(biāo)本上剩余的水;
E、以濾紙吸干或在空氣中風(fēng)干,或50℃烘干后鏡檢;
抗酸染色結(jié)果如下:
經(jīng)染色對比用孔雀石綠溶液復(fù)染后抗酸染色陰性菌呈藍(lán)綠色,背景更清晰,優(yōu)勢明顯。
參考文獻(xiàn)
CN108593396A