透明質(zhì)酸酶是一類能夠降解透明質(zhì)酸的酶的總稱。早在1928年Duran-Reynals在研究哺乳動物睪丸及其他組織提取物時(shí)發(fā)現(xiàn)了一種“擴(kuò)散因子”，可以促進(jìn)皮下注射的疫苗、染料、毒素等更好地?cái)U(kuò)散。1940年Meyer將這種“擴(kuò)散因子”命名為Hyaluronidase。此后，人們在許多組織及生物體內(nèi)檢測到了透明質(zhì)酸酶，包括細(xì)菌病毒、細(xì)菌、真菌等，非脊椎動物如水蛭、甲殼類動物的毒液中也產(chǎn)生透明質(zhì)酸酶。脊椎動物中，在蛇、蜥蜴的毒液中，睪丸及其他器官如肝臟、腎臟、淋巴系統(tǒng)及皮膚中均發(fā)現(xiàn)透明質(zhì)酸酶的存在。為了保證其穩(wěn)定性，方便使用，常常使用復(fù)雜的酶活保護(hù)劑、穩(wěn)定劑、緩沖劑。本文將介紹一種制備透明質(zhì)酸酶凍干制劑的方法^[1]。

制備步驟

將發(fā)酵液上清與透明質(zhì)酸鈉(分子量為8000Da)配制含有透明質(zhì)酸酶的料液，使用純化水定容至1L。其中，1L料液中的透明質(zhì)酸酶含量為1.4×107IU，透明質(zhì)酸鈉的含量為5g。將配制的料液分裝于500ml玻璃瓶中，裝液量為200ml/瓶。將玻璃瓶置于冷凍干燥機(jī)，設(shè)置如下冷凍程序：-18℃～-20℃環(huán)境下預(yù)凍24h，在-35℃～-40℃環(huán)境下預(yù)凍48h，在-15℃～-40℃，10～20mbar環(huán)境下干燥48h，得到透明質(zhì)酸酶凍干制劑。

優(yōu)勢

此發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn)：本配方創(chuàng)新性的采用透明質(zhì)酸鹽作為透明質(zhì)酸酶的酶活保護(hù)劑及分散劑，在生產(chǎn)低分子及寡聚透明質(zhì)酸的過程中，不會引入額外的雜質(zhì)。在不存在表面活性劑、緩沖劑的情況下，該透明質(zhì)酸酶凍干制劑可實(shí)現(xiàn)高的酶活回收率，高酶活穩(wěn)定性。透明質(zhì)酸酶凍干制劑的制備方法適應(yīng)面廣，無論是發(fā)酵液上清或是經(jīng)過不同方法純化的酶液均可以采用該方法進(jìn)行冷凍干燥。

參考文獻(xiàn)

[1] 一種透明質(zhì)酸酶凍干制劑及其制備方法. [P] CN114250212A