背景[1-3]
2'-5'-寡腺苷酸合成酶2抗體是一類可以特異性結(jié)合2'-5'-寡腺苷酸合成酶2的多克隆抗體，主要用于體外檢測(cè)2'-5'-寡腺苷酸合成酶2的免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)。
2'-5'-寡腺苷酸合成酶是抗病毒酶，它通過降解病毒和宿主RNA來抵消病毒攻擊。在分子生物學(xué)中，2'-5'-寡腺苷酸合成酶是抗病毒酶，它通過降解病毒和宿主RNA來抵消病毒攻擊。該酶在2'-特異性核苷酸轉(zhuǎn)移反應(yīng)中使用ATP來合成2'-5'-寡腺苷酸，激活潛伏的核糖核酸酶（RNASEL），導(dǎo)致病毒RNA的降解和病毒復(fù)制的抑制。
2'-5'-寡腺苷酸合成酶2
2'-5'-寡腺苷酸合成酶2是以ATP為底物，在雙鏈RNA的激活下合成以2′，5′-磷酸二酯鍵連接寡腺苷酸(2~5 A)的酶。寡腺苷酸可以與核糖核酸酶L結(jié)合使之被激活，降解RNA，從而抑制蛋白質(zhì)的合成。該酶在干擾素誘導(dǎo)下形成，因而是干擾素抗病毒和抗腫瘤過程中的一個(gè)關(guān)鍵酶。
該酶在2'-特異性核苷酸轉(zhuǎn)移反應(yīng)中使用ATP來合成2'-5'-寡腺苷酸，激活潛伏的核糖核酸酶（RNASEL），導(dǎo)致病毒RNA的降解和病毒復(fù)制的抑制。干擾素作用于靶細(xì)胞膜表面的受體后,通過信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)誘導(dǎo)一系列抗病毒蛋白產(chǎn)生,干擾病毒復(fù)制以達(dá)到抗病毒目的。2'-5'寡聚腺苷酸合成酶(2'-5'oligoadenylate synthetase,OAS)是干擾素作用于細(xì)胞后產(chǎn)生的一種重要的抗病毒蛋白,幾十年來,國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)OAS家族及其抗病毒機(jī)制進(jìn)行了大量研究并取得了一定的進(jìn)展,OAS被dsRNA激活后,催化生成2-5A,2-5A激活核酸內(nèi)切酶RNase L,降解病毒RNA,阻斷病毒蛋白合成,從而發(fā)揮抗病毒作用。
應(yīng)用[4][5]
用于2’,5’-寡腺苷酸合成酶2（OAS2）在寨卡病毒復(fù)制中的影響及其機(jī)制研究
1.ZIKV感染對(duì)OAS2表達(dá)的影響;2.ZIKV感染誘導(dǎo)OAS2高表達(dá)的機(jī)制研究;3.OAS2對(duì)ZIKV復(fù)制的影響;4.OAS2通過激活Ⅰ型干擾素信號(hào)通路抑制ZIKV復(fù)制的機(jī)制研究。
研究方法:1.ZIKV感染A549,Huh7.0,Huh7.5.1,U5A和2fTGH細(xì)胞,檢測(cè)病毒感染前后OAS2表達(dá);通過比較Huh7.0與Huh7.5.1細(xì)胞感染ZIKV后OAS2表達(dá)的變化,探究ZIKV誘導(dǎo)OAS2高表達(dá)是否通過RIG-Ⅰ介導(dǎo)的通路;通過對(duì)比U5A和2fTGH細(xì)胞感染ZIKV后OAS2表達(dá)的改變,探究ZIKV誘導(dǎo)OAS2高表達(dá)是否通過Ⅰ型干擾素介導(dǎo)的通路;
2.ZIKV感染A549細(xì)胞,高表達(dá)OAS2,檢測(cè)OAS2對(duì)ZIKV復(fù)制以及對(duì)IFNβ抗病毒活性的影響;
3.ZIKV感染A549細(xì)胞,高表達(dá)OAS2,檢測(cè)OAS2對(duì)Ⅰ型干擾素及其上游RIG-Ⅰ通路的影響;
4.ZIKV感染A549細(xì)胞,高表達(dá)OAS2,通過Western Blot檢測(cè)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄因子（STAT1）磷酸化;通過雙熒光報(bào)告實(shí)驗(yàn)檢測(cè)干擾素刺激反應(yīng)原件（ISRE）的活性;通過qRT-PCR檢測(cè)ISGs的表達(dá)情況;5.ZIKV感染A549,U5A,2fTGH以及敲低RIG-Ⅰ的A549細(xì)胞,高表達(dá)OAS2,檢測(cè)OAS2對(duì)ZIKV復(fù)制的影響是否依賴于Ⅰ型干擾素信號(hào)通路。
研究結(jié)果:1.ZIKV感染A549細(xì)胞,細(xì)胞內(nèi)OAS2的表達(dá)水平顯著升高;將A549細(xì)胞中RIG-Ⅰ敲低后,ZIKV誘導(dǎo)的OAS2顯著降低;高表達(dá)RIG-Ⅰ的A549細(xì)胞中,ZIKV誘導(dǎo)的OAS2顯著增加;
2. 在RIG-Ⅰ受體缺陷的Huh7.5.1細(xì)胞中,OAS2的表達(dá)降低;將RIG-Ⅰ高表達(dá)后,OAS2的表達(dá)升高。ZIKV感染2fTGH和U5A細(xì)胞,OAS2在兩種細(xì)胞中均能表達(dá),但是,OAS2在2fTGH細(xì)胞中的表達(dá)水平顯著高于U5A細(xì)胞;
3. 感染ZIKV的A549和2fTGH細(xì)胞中,OAS2高表達(dá)顯著抑制ZIKV復(fù)制,并且增強(qiáng)IFNβ的抗病毒活性。但是在干擾素受體缺陷的U5A細(xì)胞中,OAS2高表達(dá)對(duì)ZIKV復(fù)制無影響;
4. OAS2高表達(dá)激活RIG-Ⅰ通路促進(jìn)IFNβ的產(chǎn)生;
5. OAS2高表達(dá)激活了Jak/STAT信號(hào)通路,促進(jìn)STAT1水平的磷酸化,增強(qiáng)ISRE的活性,誘導(dǎo)其它ISGs的表達(dá);
6.敲低A549細(xì)胞中的RIG-Ⅰ,高表達(dá)OAS2對(duì)ZIKV復(fù)制無影響。研究結(jié)論:OAS2在ZIKV復(fù)制中起著重要的調(diào)節(jié)作用。ZIKV感染后通過RIG-Ⅰ依賴的通路誘導(dǎo)OAS2高表達(dá),且這種誘導(dǎo)作用不完全依賴于Ⅰ型干擾素信號(hào)通路;OAS2高表達(dá)通過促進(jìn)IFNβ產(chǎn)生以及激活Ⅰ型干擾素信號(hào)通路抑制ZIKV復(fù)制且增強(qiáng)IFNβ的抗病毒活性。
參考文獻(xiàn)
[1]Infection with a Brazilian isolate of Zika virus generates RIG‐I stimulatory RNA and the viral NS5 protein blocks type I IFN induction and signaling[J].Jonny Hertzog,Antonio Gregorio Dias Junior,Rachel E.Rigby,Claire L.Donald,Alice Mayer,Erdinc Sezgin,Chaojun Song,Boquan Jin,Philip Hublitz,Christian Eggeling,Alain Kohl,Jan Rehwinkel.European Journal of Immunology.2018(7)
[2]RIG-I Recognizes the 5′Region of Dengue and Zika Virus Genomes[J].Maxime Chazal,Guillaume Beauclair,Ségolène Gracias,Valérie Najburg,Etienne Simon-Lorière,Frédéric Tangy,Anastassia V.Komarova,Nolwenn Jouvenet.Cell Reports.2018(2)
[3]IFN‐free therapy is associated with restoration of type I IFN response in HIV‐1 patients with acute HCV infection who achieve SVR[J].C.Carlton‐Smith,J.A.Holmes,S.Naggie,A.Lidofsky,G.M.Lauer,A.Y.Kim,R.T.Chung.Journal of Viral Hepatitis.2018(5)
[4]Mycobacterium tuberculosis ESAT6 induces IFN-βgene expression in Macrophages via TLRs-mediated signaling[J].Ah-Ra Jang,Joo-Hee Choi,Sung Jae Shin,Jong-Hwan Park.Cytokine.2018
[5]廖鑫忠.2',5'-寡腺苷酸合成酶2（OAS2）在寨卡病毒復(fù)制中的影響及其機(jī)制研究[D].北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院,2019.