背景^[1][2]

混合系列蛋白激酶樣結(jié)構(gòu)域( mixed lineage kinase domain-likeprotein，MLKL)是一種激酶樣蛋白，在多種人體多個(gè)器官中中廣泛存在，在不少腫瘤組織中呈低表達(dá)狀態(tài)，如卵巢癌，并參與多種腫瘤的程序性壞死，影響腫瘤細(xì)胞的自噬和凋亡，抑制化療耐藥。MLKL 蛋白與腫瘤發(fā)生發(fā)展的關(guān)系受到越來(lái)越多學(xué)者的重視。然而MLKL 與乳腺癌臨床病理特點(diǎn)及預(yù)后的關(guān)系，國(guó)內(nèi)外的研究并不多見(jiàn)。

研究表明MLKL 低表達(dá)是乳腺癌患者預(yù)后不佳的生物學(xué)標(biāo)記物。MLKL 低表達(dá)提示乳腺癌患者組織分化不佳、腫瘤浸潤(rùn)、淋巴轉(zhuǎn)移及進(jìn)展期TNM 分期，提示MLKL 可能可以作為乳腺癌的生物學(xué)標(biāo)記物及潛在治療指標(biāo)。單克隆抗體技術(shù)起源于Kohler等創(chuàng)建的體外鼠源雜交瘤技術(shù)。經(jīng)多年研究，鼠單抗已從單純的生物實(shí)驗(yàn)室科研及臨床診斷發(fā)展到治療性抗體藥物。

但鼠單抗的主要缺陷是小鼠免疫系統(tǒng)不能識(shí)別某些免疫原，尤其是鼠源性的免疫原，而且鼠單抗的親和性不如兔來(lái)源抗體的親和性高。然而由于沒(méi)有發(fā)現(xiàn)兔源性的漿細(xì)胞瘤及病毒體外轉(zhuǎn)染兔B細(xì)胞的技術(shù)困難，直到1995年在c-myc/v-abl轉(zhuǎn)基因兔身上成功地獲得了兔漿細(xì)胞瘤細(xì)胞系，得到了穩(wěn)定的兔-兔雜交瘤，才使兔單克隆抗體技術(shù)有了突破性進(jìn)展。

近年兔單克隆抗體技術(shù)日臻完善，目前商品化的兔單抗已達(dá)數(shù)千種。 MLKL兔單克隆抗體 -20℃保存，Western一抗稀釋液-20℃或4℃保存，一年有效。Western一抗稀釋液優(yōu)先推薦4℃保存，長(zhǎng)期不使用可以考慮-20℃保存，但凍融可能會(huì)導(dǎo)致出現(xiàn)輕微的渾濁和少量不溶物。如果 MLKL兔單克隆抗體用于Western blot (WB)、免疫熒光(IF)、免疫細(xì)胞化學(xué)(ICC)等實(shí)驗(yàn)，請(qǐng)注意回收使用過(guò)的稀釋抗體。回收的抗體通常至少可以重復(fù)使用5-10次。稀釋后的抗體，包括已經(jīng)使用過(guò)的稀釋抗體，請(qǐng)4℃保存。

 MLKL兔單克隆抗體僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。如有實(shí)驗(yàn)研究桔梗皂苷D 通過(guò)FOXO3a 通路介導(dǎo)前列腺癌PC-3 細(xì)胞程序性壞死，其中使用的兔抗人MLKL單克隆抗體（MLKL兔單克隆抗體）和兔抗人磷酸化MLKL（p-MLKL）單克隆抗體均購(gòu)自英國(guó)Abcom公司。

應(yīng)用^[1]

1. 在生物標(biāo)記物開(kāi)發(fā)中的應(yīng)用

兔單克隆抗體包括MLKL兔單克隆抗體廣泛用于生命科學(xué)研究的各個(gè)領(lǐng)域，尤其在免疫組織化學(xué)以及檢測(cè)蛋白的轉(zhuǎn)譯后修飾方面具有獨(dú)特優(yōu)勢(shì)。至今已有100多種兔單克隆抗體開(kāi)發(fā)用于癌癥的IHC臨床診斷與研究，其中最具代表性的就是Her2和c-Kit的IHC診斷試劑盒。在蛋白修飾研究領(lǐng)域，如蛋白的磷酸化，在與疾病相關(guān)的蛋白質(zhì)信號(hào)通路中起到了至關(guān)重要的作用，使用磷酸化蛋白的兔單克隆抗體可以非常清楚地顯示蛋白的磷酸化程度。目前已有200多種磷酸化特異性的兔單克隆抗體面世。

2. 在治療抗體藥物開(kāi)發(fā)中的應(yīng)用

臨床使用的大多數(shù)治療用抗體均需經(jīng)體外親和力成熟這一步驟，以提高抗體的親和力。這一過(guò)程常需8至12個(gè)月，最終親和力在納摩爾級(jí)(10-9 mol/L)。兔單抗不需使用體外親和力成熟，就能達(dá)到10-11至10-13 mol/L。這種高親和力不僅減少抗體的臨床使用量，還能減少由于使用大量抗體帶來(lái)的副作用。但這種高親和力的優(yōu)勢(shì)還需在動(dòng)物和臨床試驗(yàn)中進(jìn)一步證實(shí)。

另外，與鼠單抗的人源化相比，兔單克隆抗體的人源化更容易。因?yàn)椋脝慰寺】贵w主要由一種重鏈及輕鏈基因構(gòu)成，通過(guò)分析大量的兔單克隆抗體序列發(fā)現(xiàn)，兔與人的抗體同源性更高，約60%～76%，而小鼠與人的抗體同源性略低，為57%～72%，說(shuō)明用兔單克隆抗體開(kāi)發(fā)藥物前景更廣闊。

主要參考資料

[1] 李婷婷, 崔慧斐. 兔單克隆抗體的發(fā)展及應(yīng)用前景[J]. 食品與藥品, 2012, 14(9): 373-376.

[2] MLKL 蛋白在乳腺癌根治術(shù)后患者中的應(yīng)用