背景技術(shù)

原花青素(Oligomeric proanthocyanidins, OPC) 是一種有著特殊分子結(jié)構(gòu)的多酚類化合物，具有多種生理活性，如抗氧化、抗腫瘤、抗炎、保護(hù)心血管、降血糖、降血壓、降血脂及美容護(hù)膚等。有研究表明， 葡萄籽原花青素B2是活性最強(qiáng)的低聚體原花青素，可作為衡量原花青素質(zhì)量的標(biāo)志性成分。目前，原花青素B2已廣泛應(yīng)用于食品、保健品和化妝品等領(lǐng)域，其性狀如下圖1。 

目前市場(chǎng)上原花青素B2產(chǎn)品純度參差不齊，未按照相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行均勻性、穩(wěn)定性和定值試驗(yàn)，國(guó)內(nèi)尚沒有該化合物的標(biāo)準(zhǔn)樣品。嚴(yán)重限制了相關(guān)產(chǎn)品中原花青素B2的準(zhǔn)確定量及相關(guān)的品質(zhì)分析、質(zhì)量評(píng)價(jià)等方面的研究。因此，為了提高原花青素B2分析測(cè)定的準(zhǔn)確度和質(zhì)量評(píng)價(jià)的一致性等，開展原花青素B2標(biāo)準(zhǔn)樣品的研究具有十分重要的意義。

分離純化

稱取2kg葡萄籽，經(jīng)超聲輔助法提取，50%乙醇為提取溶劑，料料液比1∶10，重復(fù)提取2次，減壓濃縮得到粗體物浸膏。稱取葡萄籽粗體物浸膏200mg，進(jìn)一步采用高速逆流色譜（High-speed Countercurrent  Chromatography，HSCCC）法和制備液相色譜法分離純化得到原花青素B2標(biāo)準(zhǔn)樣品候選物。HSCCC溶劑體系為正丁醇-乙酸乙酯-水（1∶14∶15，V/V），流速2.0mL/min；分離溫度25℃，檢測(cè)波長(zhǎng)280nm。半制備型色譜柱XBridge Prep-C18（10mm×150mm,  5μm）；流動(dòng)相A為乙腈，B為0.1%甲酸，0~90min 5%A；流速3mL/min；柱溫25℃；檢測(cè)波長(zhǎng)274nm。

原花青素B2制備過程中，根據(jù)HSCCC圖收集目標(biāo)化合物峰II（圖2），濃縮得到高純度粗提物，該粗提物再進(jìn)一步采用制備液相色譜法分離純化，將收集的目標(biāo)餾分（圖3）合并，濃縮得到原花青素B2標(biāo)準(zhǔn)樣品候選物。

參考文獻(xiàn)

[1] 徐雙雙,賀天雨,黃雯雯,等. 葡萄籽中原花青素B2分離純化及其標(biāo)準(zhǔn)樣品定值研究[J]. 分析儀器,2023(3):74-79.