背景[1-3]
鹽皮質(zhì)激素受體抗體是一類可以特異性結(jié)合鹽皮質(zhì)激素受體的多克隆抗體,主要用于體外檢測(cè)鹽皮質(zhì)激素受體的WB、Elisa、IP、IF、IHC等免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)。
鹽皮質(zhì)激素受體(MR)是包括糖皮質(zhì)激素受體(GR)、雄激素受體(AR)、孕激素受體(PR)和雌激素受體(ER)的經(jīng)典類固醇激素受體中的一個(gè)成員。這些受體是調(diào)節(jié)從器官發(fā)育和分化到情緒控制和應(yīng)激反應(yīng)的多種生理過程的激素激活的轉(zhuǎn)錄因子。
鹽皮質(zhì)激素受體抗體免疫組化
針對(duì)MR的生理激素是醛固酮,其是由腎上腺分泌的類固醇激素。MR已在血管、腦和心臟的非上皮位點(diǎn)上被定位(Bonvalet JP等,1995;Lombes M等,1992 Janaka J.等,1997)。在過去10年中,有許多研究表明鹽皮質(zhì)激素的非上皮作用造成血管和心肌的纖維化和營(yíng)養(yǎng)效應(yīng)(Brilla CG.等,1992,Ullian ME.等,1992;YoungΜ.等,1994)。另外,已經(jīng)在包括人內(nèi)皮細(xì)胞和血管平滑肌細(xì)胞(VSMC)(Hatakeyama H.等,1994)以及動(dòng)物試驗(yàn)中的心肌細(xì)胞(Silvestre JS.等,1988)中發(fā)現(xiàn)了MR。一些研究(Brilla CG等,1992;Young M.等,1994)通過刺激心肌細(xì)胞中的膠原形成將鹽皮質(zhì)激素與心肌纖維化聯(lián)系起來。Farquharson CA.等人Q000)間接地證明了醛固酮可能在慢性心力衰竭的內(nèi)皮功能障礙發(fā)揮作用。因此MR是重要的藥物靶點(diǎn),特別是對(duì)于高血壓和心力衰竭的治療。例如,醛固酮拮抗劑螺內(nèi)酯(也稱為ALDACTONE,PFIZER)與鹽皮質(zhì)激素受體結(jié)合并阻斷醛固酮的結(jié)合。這一類固醇化合物普遍用于治療充血性心力衰竭。
應(yīng)用[4][5]
用于孕早期人巨細(xì)胞病毒感染對(duì)仔鼠海馬糖皮質(zhì)激素受體和鹽皮質(zhì)激素受體蛋白表達(dá)的影響研究
人類巨細(xì)胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)是宮內(nèi)感染最常見的病毒,嬰幼兒期中重度智力障礙,是以HCMV為代表的TORCH系列宮內(nèi)感染為首要病因。海馬是學(xué)習(xí)記憶的關(guān)鍵生理學(xué)基礎(chǔ),也是人巨細(xì)胞病毒作用的主要靶區(qū),為了研究人巨細(xì)胞病毒導(dǎo)致子代學(xué)習(xí)記憶功能逐步下降的機(jī)制,采用病理組織學(xué)和分子機(jī)制,探討孕早期人巨細(xì)胞病毒感染對(duì)仔鼠海馬海馬糖皮質(zhì)激素受體和鹽皮質(zhì)激素受體蛋白表達(dá)的影響,為HCMV宮內(nèi)感染致子代子代學(xué)習(xí)記憶功能逐步下降供新的治療靶點(diǎn)。
方法:取9-10周齡SPF級(jí)SD鼠30只(雌鼠20只,雄鼠10只),按雌雄1:1合籠交配(雄鼠可多次進(jìn)行交配),將孕鼠隨機(jī)分成對(duì)照組(10只)和實(shí)驗(yàn)組(10只),分別于妊娠第5天腹腔內(nèi)注射5×10~7 L-1半數(shù)組織培養(yǎng)感染量(TCID50)HCMV懸液0.8 mL和等量的人胚成纖維細(xì)胞上清液0.8ml。分別從每組隨機(jī)抽取10只15日齡仔鼠,(1)采用Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)測(cè)試其學(xué)習(xí)記憶功能;(2)仔鼠經(jīng)4%多聚甲醛灌注后取腦組織,采用病理組織學(xué)HE染色觀察仔鼠海馬形態(tài)學(xué)變化;(3)應(yīng)用間接免疫熒光染色方法檢測(cè)仔鼠海馬(CA1區(qū)、CA3區(qū))MR、GR蛋白的表達(dá)情況。采用SPSS 16.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。
結(jié)果:1.Morris水迷宮實(shí)驗(yàn),在定位航行實(shí)驗(yàn)中,對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組仔鼠的逃避潛伏期均呈逐漸降低的趨勢(shì),實(shí)驗(yàn)組的逃避潛伏期均比對(duì)照組的時(shí)間長(zhǎng),并于第4天(t=-2.212,P<0.05)、第5天(t=-2.827,P<0.05)實(shí)驗(yàn)組較對(duì)照組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。在空間探索實(shí)驗(yàn)中,實(shí)驗(yàn)組仔鼠在目標(biāo)象限停留時(shí)間(探索正確時(shí)間)少于對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=2.390,P<O.05);實(shí)驗(yàn)組穿越平臺(tái)次數(shù)少于對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=2.477,P<O.05)。
2. 仔鼠海馬區(qū)CA1區(qū)、CA3區(qū)病理組織學(xué)HE染色顯示,對(duì)照組仔鼠海馬神經(jīng)細(xì)胞排列均勻整齊,細(xì)胞核呈圓形或橢圓形,核仁明顯,染色質(zhì)均勻;實(shí)驗(yàn)組仔鼠海馬神經(jīng)細(xì)胞排列紊亂,數(shù)目減少,細(xì)胞水腫變大,部分細(xì)胞核固縮明顯,并可見巨細(xì)胞變;
3.免疫熒光染色結(jié)果顯示,實(shí)驗(yàn)組仔鼠海馬CA1區(qū)GR(t=3.05,P<0.05)、MR(t=2.23,P<0.05)、GR/MR(t=2.24,P<0.05)平均吸光度值較對(duì)照組低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;實(shí)驗(yàn)組海馬CA3區(qū)GR(t=2.76,P<0.05)、MR(t=2.67,P<0.05)、GR/MR(t=2.43,P<0.05)平均吸光度值較對(duì)照組低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
參考文獻(xiàn)
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