背景[1-3]
小鼠17羥皮質(zhì)類固醇(17-OHCS)ELISA試劑盒用于定量檢測血清、血漿及相關(guān)液體樣本中小鼠17羥皮質(zhì)類固醇（17-OHCS）的含量。
技術(shù)原理：
(1).抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記。
(2).結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學活性。
(3).酶標記的抗原或抗體既保留其免疫學活性，又保留酶的活性。
(4).受檢標本與固相載體表面的抗原或抗體起反應。再加入酶標記的抗原或抗體，也通過反應而結(jié)合在固相載體上。
(5).此時固相上的酶量與標本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。
(6).加入酶反應的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，故可根據(jù)呈色的深淺進行定性或定量分析。
小鼠17羥皮質(zhì)類固醇(17-OHCS)ELISA試劑盒
操作步驟：
1.編號：將樣品對應微孔按序編號，每板應設(shè)陰性對照2孔、陽性對照2孔、空白對照1孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）
2.加樣：分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照50ml。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液40ml，然后再加待測樣品10ml。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，
3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶標試劑50ml，空白孔除外。
7.溫育：操作同3。
8.洗滌：操作同5。
9.顯色：每孔先加入顯色劑A50ml，再加入顯色劑B50ml，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色
15分鐘.
10.終止：每孔加終止液50ml，終止反應（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。
11.測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。
應用[4][5]
用于補腎益氣方藥治療肺腎氣（陽）虛型哮喘的現(xiàn)代臨床及實驗研究
通過對比不同中醫(yī)辨證分型的哮喘患者及正常健康人的血清、誘導痰、唾液、尿液中有關(guān)氣道炎癥、HPA軸功能的指標,擬明確肺腎氣（陽）虛型哮喘患者炎癥及HPA軸功能狀態(tài),為補腎益氣方藥干預哮喘的內(nèi)在機理研究提供依據(jù)。
方法：選取年齡18-65歲,性別不限,現(xiàn)代醫(yī)學診斷為哮喘,中醫(yī)辨證為肺腎氣（陽）虛、肺氣虛、陰虛火旺證；另選取年齡、性別匹配的健康人群作為對照組。同時排除合并肺部其他疾病的患者；一個月內(nèi)使用糖皮質(zhì)激素治療的患者。在固定時間點采集所有研究對象外周血、誘導痰、唾液、24h尿液,用Bio-Plex懸液芯片檢測痰上清液和血清中白細胞介素（Interleukin,IL）-6、腫瘤壞死因子-α（Tumor Necrosis Factor,TNF-α）、轉(zhuǎn)化生長因子-β（Transforming Growth Factor-p,TGF-p）、干擾素-γ（Interferon-y,IFN-y）水平等以觀察炎癥情況；同時用放射免疫法檢測血漿及唾液皮質(zhì)醇,24h尿游離皮質(zhì)醇（Urinary Free Cortisol,UFC）、17-羥皮質(zhì)類固醇（尿17-羥）、17-酮類固醇（尿17-酮）等指標以評估HPA軸功能。
結(jié)果：本研究共收集71例哮喘患者,其中肺腎氣（陽）虛組28例,肺氣虛組23例,陰虛火旺組20例,另選取41名健康體檢者作為正常組。各組患者性別、年齡、體重指數(shù)、吸煙、病程、疾病嚴重程度均無統(tǒng)計學差異（P>0.05）。與正常組、肺氣虛組比較,肺腎氣（陽）虛組、陰虛火旺組血清TNF-a水平明顯升高,而IFN-y明顯降低（P<0.05）,肺腎氣（陽）虛組IL-6水平明顯高于其他三組（P<0.05）。與正常組、肺氣虛組比較,肺腎氣（陽）虛組誘導痰中TNF-α、TGF-β水平明顯升高（P<0.05）,陰虛火旺組誘導痰IFN-y明顯降低（P<0.05）。
肺腎氣（陽）虛組尿游離皮質(zhì)醇、17-羥水平明顯低于其他三組,尿17-酮明顯低于正常組及陰虛火旺組。與正常組、陰虛火旺組相比,肺腎氣（陽）虛組晨8點及次日8點血皮質(zhì)醇明顯降低（P<0.05）；與正常組比較,肺腎氣（陽）虛組晨8點及次日8點唾液皮質(zhì)醇明顯降低（P<0.05）,與陰虛火旺組比較,肺腎氣（陽）虛組次日晨8點唾液皮質(zhì)醇明顯降低（P<0.05）；肺氣虛組亦出現(xiàn)血漿及唾液中晨8點及次日8點皮質(zhì)醇水平降低,但與正常組比較無統(tǒng)計學差異。
血清TNF-a.IL-6與血漿皮質(zhì)醇呈明顯的負相關(guān)（r=-0.26,P=0.03）、（r=-0.25,P=0.03）,誘導痰IL-6與唾液皮質(zhì)醇呈明顯的負相關(guān)（r=-0.26,P=0.02）。血清IFN-y與尿17-羥呈明顯的正相關(guān)（r=0.21,P=0.03）。
參考文獻
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[2]Metabolic profiling reveals therapeutic biomarkers of processed Aconitum Carmichaeli Debx in treating hydrocortisone induced Kidney-Yang deficiency syndrome rats[J].Yong Tan,Xinru Liu,Cheng Lu,Xiaojuan He,Jian Li,Cheng Xiao,Miao Jiang,Jing Yang,Ke Zhou,Zhongxiao Zhang,Weidong Zhang,Aiping Lu.Journal of Ethnopharmacology.2014(3)
[3]Metabolic Signatures of Kidney Yang Deficiency Syndrome and Protective Effects of Two Herbal Extracts in Rats Using GC/TOF MS[J].Linjing Zhao,Hongbing Wu,Mingfeng Qiu,Wei Sun,Runmin Wei,Xiaojiao Zheng,Yiting Yang,Xue Xin,Haimiao Zou,Tianlu Chen,Jiajian Liu,Lina Lu,Jing Su,Chungwah Ma,Aihua Zhao,Wei Jia,Aiping Lu.Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine.2013
[4]Icaritin opposes the development of social aversion after defeat stress via increases of GR mRNA and BDNF mRNA in mice[J].Xiao Wu,Jinfeng Wu,Shijin Xia,Bei Li,Jingcheng Dong.Behavioural Brain Research.2013
[5]厲蓓.補腎益氣方藥治療肺腎氣（陽）虛型哮喘的現(xiàn)代臨床及實驗研究[D].復旦大學,2014.