背景^[1-3]

大鼠雌三醇(E3)Elisa試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）。在預(yù)包被大鼠雌三醇(E3)止抗體（固相抗體）的微孔酶標(biāo)板中，加入大鼠雌三醇(E3)校準(zhǔn)品和待測(cè)樣本，再加入另一株HRP標(biāo)記的抗大鼠雌三醇(E3)（酶標(biāo)抗體），經(jīng)過(guò)溫育與充分洗滌，去除未結(jié)合的組分，在微孔板固相表面形成固相抗體-抗原-酶標(biāo)抗體的夾心復(fù)合物。加底物A和B，底物在HRP催化下，產(chǎn)生藍(lán)色產(chǎn)物，在終止液（2M硫酸）作用下，最終轉(zhuǎn)化為黃色，在酶標(biāo)儀450nm波長(zhǎng)上測(cè)定吸光度（OD值），吸光度（OD值）與待測(cè)樣品中大鼠雌三醇(E3)的濃度正相關(guān)。擬合校準(zhǔn)品曲線，可以計(jì)算出樣本中大鼠(E3)的濃度。

大鼠雌三醇(E3)Elisa試劑盒

大鼠雌三醇(E3)Elisa試劑盒所需器材和試劑

1、酶標(biāo)儀(波長(zhǎng)450nm濾光片)

2、37°C恒溫箱(不推薦使用細(xì)胞用CO2培養(yǎng)箱)

3、自動(dòng)洗板機(jī)或多道移液器/5ml滴管(手工洗板用)

4、無(wú)菌的EP管及一次性吸頭

5、精密的單道(0.5-10μL,5-50μL,20-200μL,200-1000μL)和多通道移液器(移液器使用前需校準(zhǔn))。

6、吸水紙及加樣槽

7、去離子水或蒸餾水

大鼠雌三醇(E3)Elisa試劑盒標(biāo)本收集:

1、收集血液的試管應(yīng)為一次性的無(wú)熱原，無(wú)內(nèi)毒素試管。

2、血漿抗凝劑推薦使用EDTA。避免使用溶血，高血脂標(biāo)本。

3、標(biāo)本應(yīng)清澈透明，懸浮物應(yīng)離心去除。

4、標(biāo)本收集后若不及時(shí)檢測(cè)，請(qǐng)按一次使用量分裝，凍存于-20℃,-70℃電冰箱內(nèi)，避免反復(fù)凍融，3-6月內(nèi)檢測(cè)。

5、 如果您的樣本中檢測(cè)物濃度高于標(biāo)準(zhǔn)品最高值，請(qǐng)根據(jù)實(shí)際情況，做適當(dāng)倍數(shù)稀釋(建議做預(yù)實(shí)驗(yàn)，以確定稀釋倍數(shù))。

操作步驟：

步驟1：向孔中加入100ul標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品，貼上覆膜，37°C靜置孵育90分鐘。

洗板：洗板2次。不浸泡。

步驟2：加入100ul生物素-抗體工作液，貼上覆膜，37°C靜置孵育60分鐘。

洗板：洗板3次。每次浸泡1分鐘。

步驟3：加入100ul HRP-鏈霉親和素(SABC)工作液，貼上覆膜，37°C靜置孵育30分鐘。

洗板：洗板5次。每次浸泡1分鐘。

步驟4：添加90ul TMB顯色底物。貼上覆膜，37°C靜置孵育10-20分鐘(請(qǐng)使用TMB顯色精準(zhǔn)控制方法)。

步驟5：添加50ul反應(yīng)終止液。立即在450nm處讀取OD450值并計(jì)算。

注意事項(xiàng)：

1、使用不同的試劑盒時(shí)，需先做好標(biāo)記，防止組分混用，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗。

2、試劑盒開(kāi)啟后，酶標(biāo)板和標(biāo)準(zhǔn)品的保存條件請(qǐng)參考組件保存條件表格(受潮后活性會(huì)下降)。如發(fā)生使用或保存不當(dāng)導(dǎo)致組件缺損，可申請(qǐng)購(gòu)買配套組件(如E002凍干標(biāo)準(zhǔn)品)。

3、請(qǐng)使用無(wú)菌一次性吸頭吸取試劑，使用后，須旋緊試劑瓶蓋，以防止微生物污染和蒸發(fā)。

4、手工洗板時(shí)，加洗液的吸頭或滴管，切勿接觸酶標(biāo)板孔。不充分的洗滌或污染容易造成假陽(yáng)性和高背景。

5、檢測(cè)過(guò)程中，請(qǐng)?zhí)崆皽?zhǔn)備好下一步實(shí)驗(yàn)所需試劑，洗板后及時(shí)將試劑加入板孔，防止板孔干燥，導(dǎo)致檢測(cè)失效。

6、在未經(jīng)確認(rèn)的情況下，請(qǐng)勿將其他批次試劑盒的試劑或其他來(lái)源的試劑用于本試劑盒。

7、請(qǐng)勿重復(fù)使用一次性吸頭，以免造成交叉污染。

8、加樣完成，貼覆膜以防孵育過(guò)程樣品的蒸發(fā)，在推薦溫度下完成孵育過(guò)程。

9、試驗(yàn)中請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服、戴口罩、手套等，做好防護(hù)工作。特別是檢測(cè)血液或者其他體液樣品時(shí)，請(qǐng)按生物試驗(yàn)室安全防護(hù)條例執(zhí)行。

應(yīng)用^[4][5]

大鼠雌三醇(E3)Elisa試劑盒可以用于低聲壓級(jí)水平次聲對(duì)未孕大鼠卵巢及胚胎和仔鼠影響的研究

通過(guò)觀察大鼠卵巢的結(jié)構(gòu)及測(cè)定雌二醇（E2）、睪酮（T）、卵泡刺激素（FSH）、黃體生成素（LH）的激素水平以探討低聲壓級(jí)水平次聲波（2～25Hz/70dB）短時(shí)間暴露對(duì)未孕SD大鼠卵巢功能的影響；通過(guò)測(cè)定雌三醇（E3）、孕酮（P）的激素水平及記錄仔鼠的數(shù)量、體質(zhì)量、身長(zhǎng)、尾長(zhǎng)、出生時(shí)的存活率、3天存活率、性別比等相關(guān)指標(biāo)以探討低聲壓級(jí)水平次聲波短時(shí)間暴露對(duì)孕鼠的胚胎和仔鼠的影響。

研究方法將40只SD雌性大鼠和6只SD雄性大鼠飼養(yǎng)兩天適應(yīng)后隨機(jī)分組：實(shí)驗(yàn)1，對(duì)照組A1與低聲壓級(jí)水平次聲處理組A2各8只，低聲壓級(jí)水平次聲波處理方法為30分鐘/次×2次/天×20天，于第21天麻醉解剖兩組大鼠后取卵巢及血液并處理，卵巢組織經(jīng)HE染色后在光學(xué)顯微鏡下觀察其結(jié)構(gòu)并通過(guò)放射免疫分析法測(cè)定血清中的雌二醇（E2）、睪酮（T）、卵泡刺激素（FSH）、黃體生成素（LH）的激素水平；實(shí)驗(yàn)2，將24只雌鼠與6只雄鼠按4:1定時(shí)合籠，記錄每只孕鼠妊娠時(shí)間，并將18只孕鼠隨機(jī)分為對(duì)照組B1、妊娠期低聲壓級(jí)水平次聲處理組B2（30分鐘/次×2次/天×妊娠第1至20天）、妊娠中晚期低聲壓級(jí)水平次聲處理組B3（30分鐘/次×2次/天×妊娠第7至20天）各6只，分別于妊娠第6、12、18天經(jīng)眼眶靜脈采血并處理，通過(guò)大鼠雌三醇(E3)Elisa試劑盒酶聯(lián)免疫法測(cè)血清中的雌三醇（E3）、孕酮（P）的激素水平，待孕鼠分娩后記錄仔鼠的數(shù)量、身長(zhǎng)、尾長(zhǎng)、體質(zhì)量、出生時(shí)存活率、3天存活率、性別比等相關(guān)指標(biāo)。

大鼠雌三醇(E3)Elisa試劑盒結(jié)果實(shí)驗(yàn)1：對(duì)照組A1和低聲壓級(jí)水平次聲處理組A2大鼠血清中雌二醇（E2）、睪酮（T）、卵泡刺激素（FSH）、黃體生成素（LH）的激素水平的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；與A1組相比，A2組卵泡的數(shù)量及形態(tài)無(wú)明顯改變，但髓質(zhì)層血管明顯擴(kuò)張。實(shí)驗(yàn)2：對(duì)照組B1、妊娠期低聲壓級(jí)水平次聲處理組B2和妊娠中晚期低聲壓級(jí)水平次聲處理組B3在不同孕期大鼠血清中雌三醇（E3）、孕酮（P）的激素水平的差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；B1、B2及B3組仔鼠的數(shù)量、身長(zhǎng)、尾長(zhǎng)、出生存活率、3天存活率、性別比無(wú)明顯差異（P＞0.05），與B1組相比，B2、B3組仔鼠的體質(zhì)量明顯增加（P＜0.05），B2與B3組仔鼠的體質(zhì)量無(wú)明顯差異（P＞0.05）。

參考文獻(xiàn)

[1]Glial cell-expressed mechanosensitive channel TRPV4 mediates infrasound-induced neuronal impairment[J].Ming Shi;;Fang Du;;Yang Liu;;Li Li;;Jing Cai;;Guo-Feng Zhang;;Xiao-Fei Xu;;Tian Lin;;Hao-Ran Cheng;;Xue-Dong Liu;;Li-Ze Xiong;;Gang Zhao.Acta Neuropathologica,2013(5)

[2]Infrasound Sensitizes Human Glioblastoma Cells to Cisplatin-Induced Apoptosis[J].Kenneth Rachlin;;Dan H.Moore;;Garret Yount.Integrative Cancer Therapies,2013(6)

[3]Infrasound increases intracellular calcium concentration and inducesapoptosis in hippocampi of adult rats[J].Zhaohui Liu;;Li Gong;;Xiaofang Li;;Lin Ye;;Bin Wang;;Jing Liu;;Jianyong Qiu;;Huiduo Jiao;;Wendong Zhang;;Jingzao Chen;;Jiuping Wang.Molecular Medicine Reports,2012(1)

[4]Transmission of infrasonic pressure waves from cerebrospinal to intralabyrinthine fluids through the human cochlear aqueduct:Non-invasive measurements with otoacoustic emissions[J].Raghida Traboulsi;;Paul Avan.Hearing Research,2007(1)

[5]韓小雪.低聲壓級(jí)水平次聲對(duì)未孕大鼠卵巢及胚胎和仔鼠影響的研究[D].暨南大學(xué),2014.