上?；菡\(chéng)生物提供的HEK293 瞬轉(zhuǎn)表達(dá)基礎(chǔ)培養(yǎng)基（Basal Medium）與補(bǔ)料培養(yǎng)基（Feed Medium）是完全化學(xué)成分限定（Chemically Defined），均不含血清、水解物及任何動(dòng)物來(lái)源的成分，適合于不同亞型 HEK293 細(xì)胞的高密度懸浮培養(yǎng)，可實(shí)現(xiàn)重組蛋白和抗體的高水平表達(dá)：培養(yǎng) 5 天表達(dá)量在200mg/L 左右，7 天表達(dá)量 500mg/L 左右，部分可達(dá) 1g/L 以上。
上?；菡\(chéng)生物提供的HEK293 瞬轉(zhuǎn)表達(dá)培養(yǎng)基已完成美國(guó) DMF 登記（DMF039790），更有力的支持客戶(hù)需求。
HEK293 細(xì)胞培養(yǎng)基產(chǎn)品描述
名稱(chēng)
備注
谷氨酰胺
葡萄糖
生長(zhǎng)因子
適用細(xì)胞
HEK293 CD05
初始培養(yǎng)基
含
6 g/L
不含
Expi293F 等
HEK293 FM01AB
補(bǔ)料培養(yǎng)基
不含
60g/L
不含
HEK293 enhancer
分泌性蛋白表達(dá)增強(qiáng)劑
不含
推薦使用說(shuō)明
關(guān)鍵參數(shù)匯總
轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞密度：3~5e6 cells/mL, DNA: 1.3mg/L, PEI:4mg/L
細(xì)胞傳代
0.3 e6 cells/mL 接種，3 天傳代一次，當(dāng)細(xì)胞倍增時(shí)間不低于對(duì)照培養(yǎng)基時(shí)認(rèn)為細(xì)胞完全適應(yīng)新培養(yǎng)基，進(jìn)入下一步驟
轉(zhuǎn)染前一天
細(xì)胞密度調(diào)整到~2 e6 cells/mL 左右
質(zhì)粒與 PEI 預(yù)處理
以 20mL 培養(yǎng)體積為例（其他培養(yǎng)體積，相關(guān)試劑需要按體積折算）
1： 取 160uL Trans PEI (母液是 0.5mg/mL),加入 1mL HEK293 CD05 培養(yǎng)基混合均勻；
2：像 1）中混合液體中加入 26ug 的質(zhì)粒（即質(zhì)粒用量 1.3mg/L)，混合均勻；
3: 靜止 15~20min
轉(zhuǎn)染
1：用新鮮培養(yǎng)基調(diào)整細(xì)胞密度至 3~5 e6cells/mL (很重要）；
2：緩慢滴加上述 PEI 與 DNA 的混合物，并搖動(dòng)搖瓶使混合物均勻分散；
3：轉(zhuǎn)染當(dāng)日記為 Day0，放入 37℃搖床中，完成轉(zhuǎn)染；
補(bǔ)料培養(yǎng)
1：轉(zhuǎn)染后~24h 內(nèi)補(bǔ)加 0.5%的 HEK293 enhancer （ 僅此一次，且只分泌性蛋白或抗體需要添加 ，膜蛋白無(wú)需加 HEK293 enhancer）和 7%的 HEK293 FM01AB；
2：Day4 再補(bǔ)加一次 7%的 HEK293 FM01AB 和 3g/L 的葡萄糖 （如培養(yǎng)時(shí)間≤5 天，此步忽略）；
3：活力≤70%即可培養(yǎng)結(jié)束或其他指定培養(yǎng)基時(shí)間
溫度及其他參數(shù)
1：溫度 37℃，不降溫
2：搖床轉(zhuǎn)速 120rpm, 50mm 振幅，5-8% CO2；
產(chǎn)品運(yùn)輸及存儲(chǔ)
運(yùn)輸：常溫或冷鏈運(yùn)輸；
存儲(chǔ)：2~8℃，干燥、避光保存；
有效期：基礎(chǔ)培養(yǎng)基干粉：2 年；
基礎(chǔ)培養(yǎng)基液體：1 年；
補(bǔ)料培養(yǎng)基干粉：2 年；
補(bǔ)料培養(yǎng)基液體：1 年（開(kāi)封后建議在 3 個(gè)月內(nèi)使用完）。
應(yīng)用范圍
上?；菡\(chéng)生物生物提供的培養(yǎng)基可用于 HEK293 細(xì)胞凍存、復(fù)蘇、傳代、高密度強(qiáng)化工藝培養(yǎng)及灌流培養(yǎng)，可
實(shí)現(xiàn)細(xì)胞快速生長(zhǎng)，維持細(xì)胞高活率及蛋白該表達(dá)。
使用指南
細(xì)胞凍存
1．準(zhǔn)備處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期狀態(tài)較好的細(xì)胞，且細(xì)胞活率在 90%以上；
2．檢測(cè)活細(xì)胞密度，計(jì)算所需的凍存培養(yǎng)基體積，計(jì)算最終細(xì)胞密度 1~1.5×10 7 cells/mL；
3．準(zhǔn)備好所需的凍存培養(yǎng)基：90%基礎(chǔ)培養(yǎng)基+10% DMSO，2~8℃冷藏保存；
4．設(shè)置離心力 200×g，離心 5 min，用凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞至凍存體積；
5．將懸浮細(xì)胞等分保存至適宜規(guī)格的細(xì)胞凍存管中；
6．將細(xì)胞凍存管置于程序降溫盒中，按照降溫標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行降溫；
7．將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到液氮罐中保存。
細(xì)胞復(fù)蘇
1．提前打開(kāi)水浴鍋，并設(shè)置溫度至 36.5℃~37.0℃；
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