上?；菡\生物提供的CHO 瞬轉(zhuǎn)表達基礎培養(yǎng)基（Basal Medium）與補料培養(yǎng)基（Feed Medium）是完全化學成分限定（Chemically Defined），均不含血清、水解物及任何動物來源的成分，適合于不同亞型中國倉鼠卵巢細胞（CHO-K1 和 CHO-S 細胞）的高密度懸浮培養(yǎng)，可實現(xiàn)重組蛋白和抗體的高水平表達：培養(yǎng) 7 天表達量在 500mg/L 左右，14 天表達量 1000mg/L 左右，部分可達 2g/L 以上。
上海惠誠生物提供 CHO 細胞瞬轉(zhuǎn)表達培養(yǎng)基已完成美國 DMF 登記（DMF039790），更有力的支持客戶需求。
產(chǎn)品描述
TransCHO
初始培養(yǎng)基
含
6 g/L
不含
CHO K1, CHOS 等
CHO FM02AB
補料培養(yǎng)基
不含
80 g/L
不含
Trans PEI
轉(zhuǎn)染試劑
0.5mg/mL
Trans PEI轉(zhuǎn)染試劑是一種分子量為40 kd的陽離子聚合物，它能與核酸形成復合物，并使該復合物進入哺乳動物細胞?？蓮V泛適用于常見細胞系，如CHO-K1、CHO-S、 HEK293、HEK293T、 Hep G2、Hela、COS-1、COS-7、NIH/3T3和SF9等。該試劑即使在有血清存在的情況下， 它仍然能高效的將核酸導入細胞。Trans PEI培養(yǎng)基可用于蛋白/抗體瞬時表達、腺相關病毒、慢病毒、疫苗、診斷試劑等領域，采用高密度強化工藝培養(yǎng)及灌流培養(yǎng)，可獲得更高的表達量或滴度。
Trans PEI轉(zhuǎn)染試劑具有如下優(yōu)點：
1.優(yōu)越的轉(zhuǎn)染效率
2.重組蛋白的高表達水平
3.更強的穩(wěn)定性（-20℃保存2年，2-8℃保存6個月）
4.低細胞毒性，易于操作
5.可提供GMP級別
6.10mL/支 0.5 mg/mL
推薦使用說明
細胞傳代
0.3 e6 cells/mL 接種，3 天傳代一次，當細胞倍增時間不低于對照培養(yǎng)基時認為細胞完全適應新培
養(yǎng)基，進入下一步驟；
轉(zhuǎn)染前一天
密度調(diào)整到 2e6 cells/mL
轉(zhuǎn)染當天
以 20mL 培養(yǎng)體積為例（其他培養(yǎng)體積，相關試劑需要按體積折算）
1：用新鮮培養(yǎng)基稀釋細胞密度至 6e6 cells/mL;
2: 用 1mL TransCHO 培養(yǎng)基稀釋 320uLTrans PEI（即終使用量 8.0 ug/mL），并混合均勻；
3：將 32ug 質(zhì)粒（即 1.6ug/mL）與加入步驟 2 中混合均勻，并孵育 15~20min ;
4: 緩慢 滴加上述混合物至培養(yǎng)基中，邊滴加邊混合，使混合物能均勻擴展；
5: 搖瓶放入搖床中，培養(yǎng)時間記為 Day0, 轉(zhuǎn)染結束
補料培養(yǎng)
1：轉(zhuǎn)染后~24h 左右補加 0.3%的 CHO enhancer （僅此一次）和 8%的 CHO FM02AB，并降溫至32℃培養(yǎng)；
2：之后每 4 天補加一次 8%的 CHO FM02AB，葡萄糖按需添加（通常 Day6 和 Day9 分別添加 4g/L即可）；
3：活力≤60%即可培養(yǎng)結束；
溫度及其他參數(shù)
1：初始 37℃，轉(zhuǎn)染 8-24h 時降溫至 32℃；
2：搖床轉(zhuǎn)速 120rpm, 50mm 振幅，5-8% CO2；
產(chǎn)品運輸及存儲
運輸：常溫或冷鏈運輸；
存儲：2~8℃，干燥、避光保存；
有效期：基礎培養(yǎng)基干粉：2 年；
基礎培養(yǎng)基液體：1 年；
補料培養(yǎng)基干粉：2 年；
補料培養(yǎng)基液體：1 年（開封后建議在 3 個月內(nèi)使用完）。
應用范圍
上海惠誠生物提供的培養(yǎng)基可用于 CHO 細胞凍存、復蘇、傳代、高密度強化工藝培養(yǎng)及灌流培養(yǎng)，可實現(xiàn)
細胞快速生長，維持細胞高活率及蛋白該表達。
使用指南
細胞凍存
1．準備處于對數(shù)生長期狀態(tài)較好的細胞，且細胞活率在 90%以上；
2．檢測活細胞密度，計算所需的凍存培養(yǎng)基體積，計算最終細胞密度 1~1.5×10 7 cells/mL；
3．準備好所需的凍存培養(yǎng)基：90%基礎培養(yǎng)基+10% DMSO，2~8℃冷藏保存；
4．設置離心力 200×g，離心 5 min，用凍存培養(yǎng)基重新懸浮細胞至凍存體積；
5．將懸浮細胞等分保存至適宜規(guī)格的細胞凍存管中；
6．將細胞凍存管置于程序降溫盒中，按照降溫標準進行降溫；
7． 將細胞轉(zhuǎn)移到液氮罐中保存。
細胞復蘇
1．提前打開水浴鍋，并設置溫度至 36.5℃~37.0℃；
2．將細胞從液氮罐中移出后，快速在水浴鍋中融化冷凍的細胞（＜3 min）；
3．將冷凍管中的細胞液全部轉(zhuǎn)移到 125 mL 含有 30 mL 預溫過的基礎培養(yǎng)基的搖瓶中；
4．置于 36.5~37.0℃，5~8% CO 2 ，轉(zhuǎn)速 120 rpm（軌道振幅 50 mm）的搖床中培養(yǎng)；
5． 細胞至少傳代 2 次，待細胞完全復蘇且活率在 90%以上，可按計劃進行后續(xù)操作。
細胞傳代
1．將基礎培養(yǎng)基放入 36.5~37.0℃條件下預熱 20 min；
2．檢測活細胞密度，按接種密度為 0.3×10 6 cells/mL 的最終傳代體積，計算所需種子液量；
3．無菌轉(zhuǎn)移所需量的種子液，添加至含所需體積的已預熱的基礎培養(yǎng)基的搖瓶中；
4．將搖瓶放入溫度 36.5~37.0℃，120 rpm（振幅 50 mm）（搖瓶底面積增大，需減小搖床轉(zhuǎn)速），
5%~8% CO 2 的細胞培養(yǎng)搖床中進行培養(yǎng)；
5．每 3 天用新鮮的培養(yǎng)基按上述步驟進行傳代培養(yǎng)。
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