上?；菡\生物提供的CHO 瞬轉(zhuǎn)表達(dá)基礎(chǔ)培養(yǎng)基（Basal Medium）與補(bǔ)料培養(yǎng)基（Feed Medium）是完全化學(xué)成分限定（Chemically Defined），均不含血清、水解物及任何動(dòng)物來源的成分，適合于不同亞型中國倉鼠卵巢細(xì)胞（CHO-K1 和 CHO-S 細(xì)胞）的高密度懸浮培養(yǎng)，可實(shí)現(xiàn)重組蛋白和抗體的高水平表達(dá)：培養(yǎng) 7 天表達(dá)量在 500mg/L 左右，14 天表達(dá)量 1000mg/L 左右，部分可達(dá) 2g/L 以上。
上?；菡\生物提供的 CHO 細(xì)胞瞬轉(zhuǎn)表達(dá)培養(yǎng)基已完成美國 DMF 登記（DMF039790），更有力的支持客戶需求。
產(chǎn)品描述
名稱
備注
谷氨酰胺
葡萄糖
生長因子
適用細(xì)胞
TransCHO
初始培養(yǎng)基
含
6 g/L
不含
CHO K1, CHOS 等
CHO FM02AB
補(bǔ)料培養(yǎng)基
不含
80 g/
不含
CHO enhancer
表達(dá)增強(qiáng)劑
不含
Trans Z 和 Trans 8
轉(zhuǎn)染試劑
NA
推薦使用說明
細(xì)胞傳代
0.3 e6 cells/mL 接種，3 天傳代一次，當(dāng)細(xì)胞倍增時(shí)間不低于對照培養(yǎng)基時(shí)認(rèn)為細(xì)胞完全適應(yīng)新培
養(yǎng)基，進(jìn)入下一步驟；
轉(zhuǎn)染前一天
密度調(diào)整到 2e6 cells/mL
轉(zhuǎn)染當(dāng)天
以 20mL 培養(yǎng)體積為例（其他培養(yǎng)體積，相關(guān)試劑需要按體積折算）
1：用新鮮培養(yǎng)基稀釋細(xì)胞密度至 5e6 cells/mL;
2: 將 44ug 質(zhì)粒（即 2.2ug/mL）與 40uL Trans Z （即 2.0uL/mL）混合，可不孵育 ；然后將此混
合物滴加到培養(yǎng)基中，并搖勻；
3: 緩慢加 滴加 140 uLTrans 8 （即 7.0uL/mL）至培養(yǎng)基中，邊滴加邊混合，使混合物能均勻擴(kuò)展；
4: 搖瓶放入搖床中，培養(yǎng)時(shí)間記為 Day0, 轉(zhuǎn)染結(jié)束；
補(bǔ)料培養(yǎng)
1：轉(zhuǎn)染后~24h 左右補(bǔ)加 0.3%的 CHO enhancer （僅此一次）和 8%的 CHO FM02AB，并降溫至
32℃培養(yǎng)；
2：之后每 4 天補(bǔ)加一次 8%的 CHO FM02AB，葡萄糖按需添加（通常 Day6 和 Day9 分別添加 4g/L
即可）；
3：活力≤60%即可培養(yǎng)結(jié)束
溫度及其他參數(shù)
1：初始 37℃，轉(zhuǎn)染~24h 時(shí)降溫至 32℃；
2：搖床轉(zhuǎn)速 120rpm, 50mm 振幅，5-8% CO2；
產(chǎn)品運(yùn)輸及存儲
運(yùn)輸：常溫或冷鏈運(yùn)輸；
存儲：2~8℃，干燥、避光保存；
有效期：基礎(chǔ)培養(yǎng)基干粉：2 年；
基礎(chǔ)培養(yǎng)基液體：1 年；
補(bǔ)料培養(yǎng)基干粉：2 年；
補(bǔ)料培養(yǎng)基液體：1 年（開封后建議在 3 個(gè)月內(nèi)使用完）。
應(yīng)用范圍
宥藝生物培養(yǎng)基可用于 CHO 細(xì)胞凍存、復(fù)蘇、傳代、高密度強(qiáng)化工藝培養(yǎng)及灌流培養(yǎng)，可實(shí)現(xiàn)
細(xì)胞快速生長，維持細(xì)胞高活率及蛋白該表達(dá)。
使用指南
細(xì)胞凍存
1．準(zhǔn)備處于對數(shù)生長期狀態(tài)較好的細(xì)胞，且細(xì)胞活率在 90%以上；
2．檢測活細(xì)胞密度，計(jì)算所需的凍存培養(yǎng)基體積，計(jì)算最終細(xì)胞密度 1~1.5×10 7 cells/mL；
3．準(zhǔn)備好所需的凍存培養(yǎng)基：90%基礎(chǔ)培養(yǎng)基+10% DMSO，2~8℃冷藏保存；
4．設(shè)置離心力 200×g，離心 5 min，用凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞至凍存體積；
5．將懸浮細(xì)胞等分保存至適宜規(guī)格的細(xì)胞凍存管中；
6．將細(xì)胞凍存管置于程序降溫盒中，按照降溫標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行降溫；
7． 將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到液氮罐中保存。
細(xì)胞復(fù)蘇
1．提前打開水浴鍋，并設(shè)置溫度至 36.5℃~37.0℃；
2．將細(xì)胞從液氮罐中移出后，快速在水浴鍋中融化冷凍的細(xì)胞（＜3 min）；
3．將冷凍管中的細(xì)胞液全部轉(zhuǎn)移到 125 mL 含有 30 mL 預(yù)溫過的基礎(chǔ)培養(yǎng)基的搖瓶中；
4．置于 36.5~37.0℃，5~8% CO 2 ，轉(zhuǎn)速 120 rpm（軌道振幅 50 mm）的搖床中培養(yǎng)；
5． 細(xì)胞至少傳代 2 次，待細(xì)胞完全復(fù)蘇且活率在 90%以上，可按計(jì)劃進(jìn)行后續(xù)操作。
細(xì)胞傳代
1．將基礎(chǔ)培養(yǎng)基放入 36.5~37.0℃條件下預(yù)熱 20 min；
2．檢測活細(xì)胞密度，按接種密度為 0.3×10 6 cells/mL 的最終傳代體積，計(jì)算所需種子液量；
3．無菌轉(zhuǎn)移所需量的種子液，添加至含所需體積的已預(yù)熱的基礎(chǔ)培養(yǎng)基的搖瓶中；
4．將搖瓶放入溫度 36.5~37.0℃，120 rpm（振幅 50 mm）（搖瓶底面積增大，需減小搖床轉(zhuǎn)速），
5%~8% CO 2 的細(xì)胞培養(yǎng)搖床中進(jìn)行培養(yǎng)；
5．每 3 天用新鮮的培養(yǎng)基按上述步驟進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
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上?；菡\生物科技有限公司自2010年成立以來，一直致力于為客戶提供試劑，儀器設(shè)備和耗材一站式服務(wù)。目前在蘇州和南通的研發(fā)生產(chǎn)基地，專注于體外診斷蛋白，靶標(biāo)蛋白，工業(yè)用酶和細(xì)胞因子的生產(chǎn)和定制，按照GMP標(biāo)準(zhǔn)，為工業(yè)客戶提供大包裝蛋白原料。