背景^[1-3]

22Rv1（人前列腺癌細(xì)胞）是一種源自異種移植的前列腺癌細(xì)胞系，最初是從閹割引起前列腺癌衰退又在其父親的雄性激素信賴(lài)型CWR22嫁接后復(fù)發(fā)的小鼠中連續(xù)傳代而得到的。這種細(xì)胞系表達(dá)前列腺特異抗原（PSA），并具有上皮細(xì)胞的形態(tài)和貼壁生長(zhǎng)的特性。

22Rv1（人前列腺癌細(xì)胞）細(xì)胞在研究中具有多種應(yīng)用價(jià)值。首先，它們可以用于研究前列腺癌的發(fā)病機(jī)制，包括雄激素受體信號(hào)通路、細(xì)胞周期調(diào)控、凋亡和侵襲轉(zhuǎn)移等方面。其次，這些細(xì)胞也可以作為藥物篩選的模型，用于評(píng)估不同藥物對(duì)前列腺癌細(xì)胞的療效和毒性。此外，22Rv1（人前列腺癌細(xì)胞）細(xì)胞還可以用于基因治療和免疫治療等研究。

在細(xì)胞培養(yǎng)方面，22Rv1（人前列腺癌細(xì)胞）細(xì)胞通常需要特定的培養(yǎng)基和條件來(lái)維持其生長(zhǎng)和活性。一般來(lái)說(shuō)，這些細(xì)胞可以在含有RPMI 1640培養(yǎng)基或MEM培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中生長(zhǎng)，同時(shí)添加10%的胎牛血清（FBS）和1%的抗生素-抗真菌混合物以防止污染。細(xì)胞的傳代和凍存也需要遵循一定的操作規(guī)程，以確保細(xì)胞的穩(wěn)定性和可靠性。

22Rv1（人前列腺癌細(xì)胞）

22Rv1（人前列腺癌細(xì)胞）培養(yǎng)操作

1)復(fù)蘇22Rv1（人前列腺癌細(xì)胞）：以下細(xì)胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)為主。

將含有1 mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10 cm皿中，加入約8 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2)22Rv1（人前列腺癌細(xì)胞）傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤(rùn)所有細(xì)胞，棄去消化液，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1 min，然后在顯微鏡下觀(guān)察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

c、按6-8 mL/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后裝入無(wú)菌離心管中，1000 rpm離心4 min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。

d、將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

3)22Rv1（人前列腺癌細(xì)胞）凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例；

a、收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，裝入無(wú)菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。

b、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無(wú)血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。

c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

應(yīng)用^[4-5]

22Rv1（人前列腺癌細(xì)胞）可以用于17-β雌二醇聯(lián)合5-氮胞苷調(diào)控ERβ及p75NTR的表達(dá)并誘導(dǎo)22Rv1前列腺癌細(xì)胞凋亡的研究

探討前列腺癌細(xì)胞中雌激素能否上調(diào)神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子受體p75NTR的表達(dá),進(jìn)一步闡明雌激素治療雄激素非依賴(lài)性前列腺癌的分子機(jī)制,提高雄激素非依賴(lài)性前列腺癌的治療效果。

方法:培養(yǎng)22Rv1（人前列腺癌細(xì)胞）,分成四個(gè)實(shí)驗(yàn)組:1.)對(duì)照組;2.)單用雌激素組;3.)單用DNA去甲基化藥物組;4.)聯(lián)合應(yīng)用雌激素及DNA去甲基化藥物組。分別應(yīng)用不同濃度的17-β-雌二醇及5氮胞苷處理22Rv1細(xì)胞。于藥物作用后24小時(shí)、48小時(shí)、72小時(shí),觀(guān)察并記錄細(xì)胞形態(tài)變化;MTT實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞生長(zhǎng)增殖抑制情況;流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況;RT-PCR、western-blotting實(shí)驗(yàn)檢測(cè)雌激素受體ERα、ERβ,神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子受體p75NTR、trkA基因表達(dá)情況的變化,另外通過(guò)western-blotting技術(shù)檢測(cè)相應(yīng)藥物處理后核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB蛋白在胞漿及胞核內(nèi)分布改變來(lái)初步探討藥物作用后22Rv1細(xì)胞發(fā)生凋亡的機(jī)制。

結(jié)果:17-β雌二醇及5-氮胞苷能不同程度抑制22Rv1（人前列腺癌細(xì)胞）增殖,并誘導(dǎo)其凋亡,聯(lián)合用藥效果明顯增強(qiáng)。17-β雌二醇抑制22Rv1細(xì)胞增殖的最適濃度為10-6M,單用其細(xì)胞增殖抑制率為13.87%,聯(lián)合5氮胞苷(2μg/ml)后22Rv1（人前列腺癌細(xì)胞）增殖抑制率為41.8%。藥物處理72小時(shí)后,單用17-β雌二醇組約23.6%22Rv1細(xì)胞發(fā)生凋亡,單用5氮胞苷組為29.2%,而聯(lián)合用藥組為52.9%(p＜0.05);17-β雌二醇能誘導(dǎo)ERβ及p75NTR表達(dá),聯(lián)合應(yīng)用5氮胞苷后此作用明顯增強(qiáng)(p＜0.05)。聯(lián)合用藥能明顯抑制核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB蛋白自胞漿轉(zhuǎn)位至胞核內(nèi)。

結(jié)論:22Rv1（人前列腺癌細(xì)胞）中雌激素能誘導(dǎo)神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子受體p75NTR表達(dá),DNA去甲基化藥物能增強(qiáng)ERβ表達(dá),并能加強(qiáng)雌激素誘導(dǎo)p75NTR表達(dá)的作用。雌激素及5-氮胞苷的作用與NF-κB信號(hào)通路抑制相關(guān),雌激素聯(lián)合DNA去甲基化藥物通過(guò)調(diào)控ERβ及p75NTR的表達(dá)可能是治療雄激素非依賴(lài)性前列腺癌的有效方法。

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