背景及概述^[1]

西伯利亞遠(yuǎn)志口山酮B可用于遠(yuǎn)志UPLC測定。遠(yuǎn)志為遠(yuǎn)志科遠(yuǎn)志屬植物遠(yuǎn)志Polygala.tenuifolia Willd.或卵葉遠(yuǎn)志Polygala.sibirica L.的干燥根，其味苦、辛、溫，歸心、腎、脾經(jīng)，具有安神益智、祛痰、消腫之功效，用于心腎不交引起的失眠多夢、健忘驚悸、神志恍惚等。市售遠(yuǎn)志藥材品質(zhì)參差不齊，polygalaxanthoneⅢ、3,6'-disinapoyl sucrose含量總體偏低，藥材質(zhì)量難以控制。近年來，針對遠(yuǎn)志質(zhì)量評價(jià)等方面的研究也多為個(gè)別成分為指標(biāo)的含量測定分析。姜勇等開展了遠(yuǎn)志指紋圖譜研究，但所建立的HPLC指紋圖譜檢測時(shí)間為80min，耗時(shí)長，損耗試劑多，不利于高通量分析，同時(shí)存在共有峰數(shù)目較少、缺乏共有峰定性等問題。綜上所述，建立一種全面、快速的遠(yuǎn)志藥材質(zhì)量評價(jià)方法很有必要。

UPLC測定方法^[1]

一種遠(yuǎn)志藥材有效成分的含量檢測方法，其特征在于，所述方法包括如下步驟：

步驟1、對照品溶液制備：取西伯利亞遠(yuǎn)志糖A5、西伯利亞遠(yuǎn)志糖A6、西伯利亞遠(yuǎn)志口山酮B、球腺糖A、遠(yuǎn)志口山酮Ⅲ、3,6'-二芥子?；崽?，甲醇定容制成混合對照品溶液；

步驟2、供試品溶液制備：取遠(yuǎn)志藥材含水低級醇提取后，濾過，得到供試品溶液；

步驟3、將對照品溶液和供試品溶液分別注入超高效液相色譜儀，得到色譜圖，根據(jù)色譜圖計(jì)算供試品中的有效成分含量。

其中，步驟1所述混合對照品溶液，其中各組分的含量分別為：

每1ml含西伯利亞遠(yuǎn)志糖A5 35-40ug、西伯利亞遠(yuǎn)志糖A6 42-52ug、西伯利亞遠(yuǎn)志口山酮B20-26ug、球腺糖A 25-31ug、遠(yuǎn)志口山酮Ⅲ24-30ug、3,6'-二芥子?；崽?34-286ug的混合對照品溶液，優(yōu)選的，西伯利亞遠(yuǎn)志糖A5、西伯利亞遠(yuǎn)志糖A6、西伯利亞遠(yuǎn)志口山酮B、球腺糖A、遠(yuǎn)志口山酮Ⅲ、3,6'-二芥子?；崽堑暮糠謩e為39.8mg/L、47.7m g/L、23.9mg/L、28.2mg/L、27.4mg/L、263mg/L的混合對照品溶液。

其中，步驟2所述含水低級醇為甲醇或乙醇的水溶液。所述的提取方法包括回流法或超聲波提取法。

優(yōu)選步驟2供試品溶液配制方法如下：取遠(yuǎn)志藥材用30-100％低級醇超聲提取10-60分鐘或回流提取2-3次每次1-1.5小時(shí)。其中的含水低級醇選自30％-100％甲醇或30％-100％乙醇溶液，優(yōu)選30％-100％甲醇，70％甲醇溶液超聲提取30分鐘。。

步驟3中所述的超高效液相色譜條件：UPLC色譜儀C18色譜柱、流動相酸水-乙腈溶液梯度洗脫、流速0.3-0.4mL/min、檢測波長300-330nm、柱溫25-35℃。

所述的梯度洗脫條件為0～1min，10％乙腈；1～2.5min，10％～14％乙腈；2.5～4min，14％～16％乙腈；4～9min，16％～25％乙腈；9～12min，25％乙腈；12～14min，25％～27％乙腈；14～16min，27％～30％乙腈；16～18min，30％～39.8％乙腈；18～21min，39.8％～40％乙腈；21～23min，40％～60％乙腈；23～24min，60％～100％乙腈；24～26min，100％～10％乙腈。

經(jīng)過測定，所述遠(yuǎn)志藥材中，西伯利亞遠(yuǎn)志糖A5含量0.4-1.7mg/g、西伯利亞遠(yuǎn)志糖A6含量0.4-1.6mg/g、西伯利亞遠(yuǎn)志口山酮B含量0.5-1.5mg/g、球腺糖A含量0.2-0.8mg/g、遠(yuǎn)志口山酮Ⅲ含量0.3-1.0mg/g、3,6'-二芥子?；崽呛?.9-6.9mg/g。

其中，步驟3、優(yōu)選UPLC C18色譜柱為T3鍵合色譜柱，流速0.4mL/min、檢測波長320nm、柱溫30℃。

本發(fā)明進(jìn)一步提供一種遠(yuǎn)志藥材超高效液相指紋圖譜建立方法，其特征在于，所述方法，步驟如下：

步驟1、供試品溶液制備：取多批次遠(yuǎn)志藥材含水低級醇提取后，濾過，得到供試品溶液；

步驟2、將供試品溶液注入超高效液相色譜儀，得到色譜圖，對所有色譜圖相似度評價(jià)得到含有37個(gè)共有峰的遠(yuǎn)志藥材的參照指紋圖譜

步驟3、采用質(zhì)譜分析法；并對37個(gè)共有峰進(jìn)行歸屬，鑒定出37個(gè)共有峰中的33個(gè)峰；

其中，超高效液相色譜的色譜條件如下：

UPLC色譜儀C18色譜柱、流動相酸水-乙腈溶液梯度洗脫、流速0.3-0.4mL/min、檢測波長300-330nm、柱溫25-35℃。

所述的梯度洗脫條件為0～1min，10％乙腈；1～2.5min，10％～14％乙腈；2.5～4min，14％～16％乙腈；4～9min，16％～25％乙腈；9～12min，25％乙腈；12～14min，25％～27％乙腈；14～16min，27％～30％乙腈；16～18min，30％～39.8％乙腈；18～21min，39.8％～40％乙腈；21～23min，40％～60％乙腈；23～24min，60％～100％乙腈；24～26min，100％～10％乙腈。

其中，所述的對共有峰進(jìn)行歸屬，采用質(zhì)譜分析法，其中質(zhì)譜條件如下：采用電噴霧離子源ESI，負(fù)離子模式，質(zhì)量掃描范圍100-2000Da；毛細(xì)管電壓為2.5-3kV；錐孔電壓為10-50V；離子源溫度為80-120℃；霧化溫度為200-300℃；載氣流速為400-1000L/h，碰撞能量(CE)40-100V,優(yōu)選60-80V。

優(yōu)選采用電噴霧離子源(ESI)，負(fù)離子MSE模式，霧化氣體為高純度氮?dú)?N2)，碰撞氣體為高純度氬氣(Ar)。質(zhì)量掃描范圍100～2000Da；毛細(xì)管電壓為3kV；錐孔電壓為40V；離子源溫度為120℃；霧化溫度為300℃；載氣流速為800L/h，碰撞能量(CE)60～80V；采用亮氨酸-腦啡肽進(jìn)行精確質(zhì)量校正([M-H]-＝554.2615)。

參考文獻(xiàn)

[1] [中國發(fā)明,中國發(fā)明授權(quán)] CN201511010555.5 一種遠(yuǎn)志UPLC測定方法