背景[1-3]
普通肉湯瓊脂培養(yǎng)基用于細菌總數(shù)測定、保存菌種及純培養(yǎng)，也可用于消毒效果測定。
營養(yǎng)瓊脂使用原理：蛋白胨和牛肉膏粉提供氮源、維生素、氨基酸和碳源;氯化鈉能維持均衡的滲透壓;瓊脂是培養(yǎng)基的凝固劑。
營養(yǎng)瓊脂配方(每升)：蛋白胨10g；牛肉膏粉3g；氯化鈉5g；瓊脂15g；最終pH 7.3±0.2。
普通肉湯瓊脂培養(yǎng)基
營養(yǎng)瓊脂使用方法：
1、稱取本品33g，加入蒸餾水或去離子水1 L，攪拌加熱煮沸至完全溶解，分裝三角瓶，121℃高壓滅菌15min，備用。
2、(食品)以無菌操作稱取檢樣25克(或25mL)，放入含有225mL滅菌生理鹽水或其他稀釋液的玻璃三角瓶中(瓶內(nèi)預置適當數(shù)量的玻璃珠)，充分振搖，即為1：10的均勻稀釋液。依次做1：100，1：1000……稀釋液。
3、根據(jù)對樣品污染情況的估計，選擇2—3個合適的稀釋度，分別在做10倍稀釋的同時，吸取1mL稀釋液于滅菌平皿中，每個稀釋度做2個平皿。
4、稀釋液移入平皿后應及時將涼至46℃左右的培養(yǎng)基注入平皿約15mL，并轉(zhuǎn)動平皿使混合均勻，同時將營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基傾入加有1mL稀釋液的滅菌平皿內(nèi)作空白對照。待瓊脂凝固后，倒置于36±1℃溫箱中培養(yǎng)48±2h。
5、觀察結(jié)果。
6、菌落計數(shù)方法：
做平板菌落計數(shù)時，可用肉眼觀察，必要時用放大鏡檢查，以防遺漏，在計下各平板的菌落數(shù)后，求出同稀釋度的各平板平均菌落總數(shù)。
應用[4][5]
用于肥胖與胃食管反流病的關(guān)系及肥胖大鼠食管下段菌群及乳桿菌種的變化的研究
通過細菌培養(yǎng)、變性梯度凝膠電泳（DGGE）及測序的方法,以期了解高脂飲食誘導的肥胖是否可影響食管下段的菌群組成。
方法：1.高脂飲食誘導的肥胖大鼠模型的建立20只SD大鼠適應性喂養(yǎng)1w后,隨機分為兩組,每組10只,分別為高脂飲食組和正常飲食對照組,7w末處死大鼠,通過對大鼠的體重的變化、Lee’s指數(shù)、血清TG、TCH的檢測了解高脂飲食大鼠的成模情況。
2. 菌群分析方法：通過選擇性培養(yǎng)基分析正常飲食及高脂飲食誘導下兩組SD大鼠食管下段粘膜可培養(yǎng)細菌的組成及菌群計數(shù)變化。總需氧菌：營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基,金黃色葡萄球菌：高鹽甘露醇瓊脂培養(yǎng)基,放線菌：放線菌肉湯培養(yǎng)基,腸球菌：TTC瓊脂培養(yǎng)基,KF鏈球菌：KF鏈球菌瓊脂培養(yǎng)基,腸桿菌：EMB瓊脂培養(yǎng)基,總厭氧菌：厭氧菌瓊脂培養(yǎng)基,強化梭菌：強化梭菌瓊脂培養(yǎng)基,產(chǎn)氣莢膜梭菌：PY瓊脂培養(yǎng)基,乳桿菌：LBS培養(yǎng)基,雙歧桿菌：BS瓊脂培養(yǎng)基。
3.利用分子生物學方法分析乳桿菌種的變化：提取SD大鼠食管下段粘膜可培養(yǎng)乳桿菌DNA,并通過引物擴增16SrDNA產(chǎn)物,使用變性梯度凝膠電泳（DGGE）分離16SrDNA產(chǎn)物,切下單獨條帶凝膠擴增純化產(chǎn)物后測序,所得序列在GenBank數(shù)據(jù)庫中進行Blast比對分析。
參考文獻
[1]Development of gut microflora in obese and lean rats[J].Folia Microbiologica.2010(4)
[2]Inflammation and Intestinal Metaplasia of the Distal Esophagus Are Associated With Alterations in the Microbiome[J].Liying Yang,Xiaohua Lu,Carlos W.Nossa,Fritz Francois,Richard M.Peek,Zhiheng Pei.Gastroenterology.2009(2)
[3]Gastroesophageal Reflux Disease（GERD）:Risk Factors,and Impact on Quality of Life—A Population-based Study[J].Guy D.Eslick,Nicholas J.Talley.Journal of Clinical Gastroenterology.2009(2)
[4]Dysfunction of the lower esophageal sphincter and dysmotility of the tubular esophagus in morbidly obese patients[J].Obesity Surgery.2009(8)
[5]趙鑫.肥胖與胃食管反流病的關(guān)系及肥胖大鼠食管下段菌群及乳桿菌種的變化的研究[D].中南大學,2011.