背景[1-3]
ANTI-PD-L1抗體是一類可以特異性結(jié)合PD-L1的多克隆抗體，主要用于檢測(cè)PD-L1的Western Blot、IHC-P、IF、ELISA、Co-IP等多種免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)。
檢測(cè)原理：雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中PD-L1水平。用純化的PD-L1抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入PD-L1，再與HRP標(biāo)記的PD-L1抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過(guò)徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的PD-L1呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD值），通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中PD-L1濃度。
PD-1的全稱是程序性死亡受體-1，屬于CD28超家族成員，是由268個(gè)氨基酸組成的I型跨膜蛋白。它是在1992年由日本京都大學(xué)的Tasuku Honjo教授發(fā)現(xiàn)的，可在T細(xì)胞、B細(xì)胞等免疫細(xì)胞表面表達(dá)。不過(guò)在T細(xì)胞未活化時(shí)，幾乎不表達(dá)PD-1，僅在T細(xì)胞活化之后，PD-1才在T細(xì)胞表面表達(dá)。
PD-L1(programmed death ligand 1)全稱程序性死亡受體配體1，是PD-1（programmed cell death 1,程序性死亡受體1）的配體。PD-L1屬于細(xì)胞膜上的一個(gè)跨膜蛋白，表達(dá)在T細(xì)胞、B細(xì)胞等免疫細(xì)胞以及腫瘤細(xì)胞上，研究表明當(dāng)腫瘤細(xì)胞膜上的PD-L1與T細(xì)胞等免疫細(xì)胞上的PD-1結(jié)合后，腫瘤細(xì)胞發(fā)出抑制性信號(hào)，進(jìn)而T細(xì)胞不能識(shí)別腫瘤細(xì)胞和對(duì)腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生殺傷作用，機(jī)體的免疫功能受到抑制。
應(yīng)用[4][5]
用于PD-L1和PD-1在胃癌組織中的表達(dá)及其臨床意義研究
采用免疫組織化學(xué)PV-6000兩步法檢測(cè)其中PD-L1和PD-1蛋白表達(dá),采用染色強(qiáng)度分級(jí)和陽(yáng)性細(xì)胞密度分級(jí)的乘積評(píng)定PD-L1表達(dá),采用細(xì)胞計(jì)數(shù)法評(píng)估PD-1表達(dá),采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件分析其與患者各項(xiàng)臨床指標(biāo)及預(yù)后的關(guān)系。
結(jié)果:1.胃癌組織中PD-L1蛋白表達(dá)陽(yáng)性率為66.97%,主要定位在胃癌細(xì)胞和癌間質(zhì)淋巴細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞膜,其中癌細(xì)胞上表達(dá)陽(yáng)性率為66.05%,癌間質(zhì)淋巴細(xì)胞上表達(dá)陽(yáng)性率為33.94%;
PD-1蛋白表達(dá)陽(yáng)性率為40.83%,主要定位在腫瘤浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞(TIL)的細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞膜;20例癌旁組織均無(wú)PD-L1和PD-1蛋白表達(dá)。轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)中PD-L1和PD-1蛋白有表達(dá),并且與其對(duì)應(yīng)的原發(fā)腫瘤組織表達(dá)高度一致,一致率分別為76.1%和86.7%。
2.胃癌組織中癌間質(zhì)浸潤(rùn)的淋巴細(xì)胞上PD-L1表達(dá)與PD-1表達(dá)呈顯著正相關(guān)(P=0.006),而癌細(xì)胞上PD-L1表達(dá)與PD-1表達(dá)無(wú)顯著相關(guān)性(P>0.05)。
3.胃癌細(xì)胞中PD-L1表達(dá)與p TNM分期(P<0.01)、浸潤(rùn)層面(P<0.01)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況(P<0.01)及脈管癌栓(P<0.05)密切相關(guān),而胃癌間質(zhì)細(xì)胞中PD-L1表達(dá)僅與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與否(P<0.05)相關(guān)。胃癌組織中PD-1表達(dá)與各臨床病理特征均無(wú)顯著相關(guān)性。
參考文獻(xiàn)
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