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紅細胞裂解液的作用

2020/10/25 9:01:40

細胞裂解液常用于細胞上游的操作。最常用的裂解液是RIPA,可用于提取細胞和組織中的可溶性蛋白(離心后提取上清)。但最近十年來,關(guān)于裂解液對實驗的影響時有報道。如RIPA 裂解液可強烈影響IFN 抗原抗體間的結(jié)合,不宜用于ELISA 檢測IFN 時細胞和組織樣本的裂解。

紅細胞裂解液的使用在動物試驗中極其頻繁,其與PBS、生理鹽水、細胞培養(yǎng)基,并稱實驗室四大液體耗材。然而紅細胞裂解液是如何達到裂解紅細胞但是又不破壞其他有核細胞效果的呢。

紅細胞裂解液的配方

實驗室常用自配紅細胞裂解液的主要成分為:碳酸氫鉀(1g),氯化銨(8.3g)以及EDTA.2Na(0.037g),最終用KOH和HCl調(diào)節(jié)PH值至7.2-7.4(此配方為配制1000ml紅裂液)。然后消高壓,4℃儲存、備用。

由于EDTA.2Na的用量很小,如果稱取0.037g必定會造成較大的稱量誤差,所以我往往會準備一瓶EDTA.2Na的儲存液(0.37gEDTA.2Na溶于1000ml ddH2O中,每次配置1000ml紅裂液時從中吸取100ml儲存液)

紅細胞裂解液各個成分在裂解過程中的作用

氯化銨是紅細胞裂解液中主要的效應物質(zhì),銨根離子不能透過細胞膜,而其他離子可以通過,這樣就造成細胞內(nèi)外離子濃度差異,形成了滲透壓差,外部的水分會擴散至胞內(nèi),使細胞膨脹。由于紅細胞結(jié)構(gòu)相對簡單,因此膨脹的耐受能力較差,絕大部分就會被漲破。碳酸鹽的主要作用為PH緩沖。EDTA與鎂離子和鈣離子形成的螯合物主要起到破壞細胞膜穩(wěn)態(tài)的作用,此作用對白細胞影響很小,所以這種裂解液可以在裂解紅細胞的同時較小的影響白細胞。

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