產(chǎn)品簡介

紅細胞裂解液（Red Blood Cell Lysis Buffer，或稱ACK Lysis Buffer），是一種經(jīng)典的用于從人或鼠等的血液或組織樣品中去除無核紅細胞的裂解液，幾乎不損傷淋巴細胞（lymphocyte）或其它有核細胞。本產(chǎn)品是利用細胞內(nèi)滲透壓濃度差而導致細胞膜脹破的原理裂解紅細胞。主要成分包含氯化銨、碳酸氫鉀、Na₂EDTA。因銨根離子無法通過細胞膜，而其他離子可以通過，造成細胞內(nèi)外的離子濃度差異，外部水分擴散至細胞內(nèi)，使紅細胞膨脹，達到裂解效果。

經(jīng)紅細胞裂解液裂解得到的組織細胞中不含紅細胞，可進一步用于淋巴細胞的分離純化、原代培養(yǎng)、細胞融合、流式細胞分析、核酸與蛋白的提取等。本裂解液適用于人，大小鼠等哺乳動物新鮮血液，不適用于有核紅細胞的裂解，例如鳥或禽類的紅細胞。本產(chǎn)品經(jīng)過無菌處理。

保存條件

常溫配送。4 oC保存，1年有效。

注意事項

1．本產(chǎn)品為無菌試劑，使用時請注意無菌操作，避免細菌污染。

2．通常情況下，血液樣品與紅細胞裂解液按1:3比例裂解，對一些特殊病例如白血病、紅細胞增多癥等，建議采用1:4或更高比例以保證結(jié)果。

3．在離心洗滌后，如發(fā)現(xiàn)極微量的紅細胞，可繼續(xù)試驗，不會影響后續(xù)檢測。

4．本產(chǎn)品僅用于科學研究，不得用于臨床診斷和治療，不得用于食品和藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。

5．為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

使用說明

對于組織細胞樣本：

1．新鮮組織經(jīng)過膠原酶或胰酶等消化處理，通過適當方法分散成細胞懸液，離心棄上清。

2．加入3-5倍細胞體積的紅細胞裂解液，輕輕吹打混勻，裂解1-2 min。例如細胞沉淀的體積為1 mL，則加入3-5 mL的紅細胞裂解液。本步驟在室溫或4℃操作均可。

3．400-500 g離心5 min，棄紅色上清。4oC離心效果更佳。

4．如果發(fā)現(xiàn)紅細胞裂解不完全，可以重復上述步驟2和步驟3一次。通常極微量的紅細胞不會影響后續(xù)的一些檢測。

5．洗滌1-2次：加入適量PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液，重懸沉淀，400-500 g離心2-3 min，棄上清?？稍僦貜?/span>1次，共洗滌1-2次。洗滌液的用量通常應至少為細胞沉淀體積的5倍。4oC離心效果更佳。

6．根據(jù)實驗需要用適當溶液重懸細胞沉淀后即可進行計數(shù)等后續(xù)實驗。

對于組織細胞樣本無需洗滌的快速操作：

1．新鮮組織經(jīng)過膠原酶或胰酶等消化處理，通過適當方法分散成細胞懸液，離心棄上清。

2．對于0.2 mL細胞沉淀加入1 mL紅細胞裂解液，輕輕吹打混勻，裂解1-2 min。本步驟在室溫或4oC操作均可。

3．加入15-20 mL PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液，混勻。

4．400-500 g離心5 min，棄紅色上清。4oC離心效果更佳。

5．如果發(fā)現(xiàn)紅細胞裂解不完全，可以重復上述步驟2和步驟3一次。通常極微量的紅細胞不會影響后續(xù)的一些檢測。

6．根據(jù)實驗需要用適當溶液重懸細胞沉淀后即可進行計數(shù)等后續(xù)實驗。

說明：對于常規(guī)步驟，多一步洗滌過程中的離心，但可以節(jié)省洗滌液的用量，并且洗滌效果也更好一些，同時不需要大體積的離心管?？焖俨襟E少了一次離心，但洗滌效果略差一些，同時需要大體積的離心管。

對于血液樣本：

1．取新鮮抗凝血，400-500 g離心5 min，棄上清。

2．加入6-10倍細胞體積的紅細胞裂解液，輕輕吹打混勻，裂解1-2 min。例如細胞沉淀的體積為1 mL，則加入6-10 mL的紅細胞裂解液。本步驟在室溫或4度操作均可。注意：對于鼠的血液，裂解1-2 min已經(jīng)足夠，對于人的外周血，宜延長裂解時間至4-5 min，并且裂解過程中宜適當偶爾搖動以促進紅細胞裂解。

3．400-500 g離心5 min，棄紅色上清。 4oC離心效果更佳。

4．如果發(fā)現(xiàn)紅細胞裂解不完全，可以重復上述步驟2和步驟3一次。通常極微量的紅細胞不會影響后續(xù)的一些檢測。

5．洗滌1-2次：加入適量PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液，重懸沉淀，400-500 g離心2-3 min，棄上清?？稍僦貜?/span>1次，共洗滌1-2次。洗滌液的用量通常應至少為細胞沉淀體積的5倍。4oC離心效果更佳。

6．根據(jù)實驗需要用適當溶液重懸細胞沉淀后即可進行計數(shù)等后續(xù)實驗。

注意：對于微量或少量的血液樣品，可以在步中不進行離心棄上清的操作，直接在第二步中加入10倍血液體積的紅細胞裂解液，并在室溫或4oC裂解4-5 min。對于鼠的血液，裂解4-5 min已經(jīng)足夠，對于人的外周血，宜延長裂解時間至10 min，但通常不宜超過15 min，并且裂解過程中宜適當偶爾搖動以促進紅細胞裂解。后續(xù)步驟相同。

對于血液樣本無需洗滌的快速操作：

1．每1 mL新鮮抗凝血中加入10 mL紅細胞裂解液，輕輕吹打混勻，裂解4-5 min。本步驟在室溫或4度操作均可。注意：對于鼠的血液，裂解4-5 min已經(jīng)足夠，對于人的外周血，宜延長裂解時間至10 min，但通常不宜超過15 min，并且裂解過程中宜適當偶爾搖動以促進紅細胞裂解。

2．加入20-30 mL PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液，混勻。

3．400-500 g離心5 min，棄紅色上清。4oC離心效果更佳。

4．如果發(fā)現(xiàn)紅細胞裂解不完全，可以重復上述步驟2和步驟3一次。通常極微量的紅細胞不會影響后續(xù)的一些檢測。

5．根據(jù)實驗需要用適當溶液重懸細胞沉淀后即可進行計數(shù)等后續(xù)實驗。

說明：對于常規(guī)步驟，多一步洗滌過程的離心，但可以節(jié)省洗滌液的用量，并且洗滌效果也更好一些，同時不需要大體積的離心管?？焖俨襟E少了一次離心，但洗滌效果略差一些，同時需要大體積的離心管。