背景^[1-3]

類桿菌膽汁七葉苷瓊脂主要用于脆弱擬桿菌群的分離培養(yǎng)。

檢驗原理：

胰蛋白胨、大豆胨提供細菌生長的基本營養(yǎng)；氯化鈉維持滲透壓；較高含量的牛膽粉可抑制革蘭氏陽性菌的生長，并能與氯化血紅素一同促進脆弱擬桿菌的生長；慶大霉素為光譜抗生素，對多數(shù)腸桿菌、假單胞菌、葡萄球菌、鏈球菌、芽孢桿菌等有較強的抗菌活性，可抑制多數(shù)雜菌的生長，可促進脆弱擬桿菌的生長；瓊脂為凝固劑；七葉苷和檸檬酸鐵銨為指示劑，脆弱擬桿菌可分解七葉苷生成七葉素，與檸檬酸鐵銨反應(yīng)變黑，使菌落呈現(xiàn)棕黑色。

類桿菌膽汁七葉苷瓊脂

類桿菌膽汁七葉苷瓊脂配制方法：

1.稱取61.6 g培養(yǎng)基，加蒸餾水至1 L，攪拌均勻，pH值

調(diào)節(jié)至7.0±0.2；

2.121℃高溫滅菌15 min或115℃高溫滅菌20 min；

3.固體培養(yǎng)基冷卻到50-60℃，傾倒平皿，4℃避光保存?zhèn)溆谩?/p>

類桿菌膽汁七葉苷瓊脂使用注意事項：

1.注意無菌操作，避免微生物污染。

2.根據(jù)菌株生長特性，可適當(dāng)調(diào)整pH值。

3.該培養(yǎng)基僅用于科研領(lǐng)域，不宜用于臨床診斷或其它用途。

4.稱量時注意粉塵，佩戴口罩操作以避免引起呼吸道系統(tǒng)不適。

5.干粉培養(yǎng)基使用后立即旋緊瓶蓋，避免吸潮結(jié)塊。未開封產(chǎn)品保質(zhì)期三年，開封后根據(jù)存放條件的不同保質(zhì)時間存在一定的差異。

應(yīng)用^[4][5]

類桿菌膽汁七葉苷瓊脂可以用于雞源主要腸球菌快速檢測方法的建立

腸球菌作為一種重要的條件致病菌,可引起多種動物和人感染,以雞最為敏感,尤其以雛雞最為嚴(yán)重。可引起雛雞生長抑制、心內(nèi)膜炎、敗血癥、腦軟化、骨髓炎等疾病,給養(yǎng)雞業(yè)帶來了嚴(yán)重的損失。因此,探究雞感染腸球菌種類及其毒力,建立雞源主要腸球菌的快速檢測方法,可應(yīng)用于雞腸球菌病和雛雞及雞胚早期感染的防治。為探究鶉雞腸球菌和小腸腸球菌感染情況,采集1日齡病、弱雛雞,進行大體剖檢和病理切片顯微觀察病理變化。肝臟分離純化細菌,對分離株進行形態(tài)學(xué)觀察、生化鑒定,提取其DNA對16S rDNA基因序列進行PCR擴增、測序、比對進行鑒定。結(jié)果顯示病、弱雛雞腹部偏大、臍部出血,剖檢可見肝臟呈土黃色,卵黃吸收不良;鏡檢可見肺臟充血;肝臟組織充血、淤血,充滿空泡。分離株在營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上,菌落細小;在類桿菌膽汁七葉苷瓊脂上,培養(yǎng)基呈棕黑色;革蘭染色為陽性球菌;生化試驗結(jié)果符合腸球菌的特點;結(jié)合16S rDNA基因序列比對分析,鑒定分離株EH-1為小腸腸球菌,分離株EG-1、EG-2為鶉雞腸球菌。較早在國內(nèi)確定了雞的小腸腸球菌和鶉雞腸球菌感染。為弄清不同種腸球菌毒力強弱及毒力基因攜帶情況。以PCR方法對4株腸球菌的6種毒力基因進行檢測,并進行雞胚致病性試驗,對3株腸球菌進行毒力分析。結(jié)果顯示分離株EG-1僅檢測出ace基因;分離株EH-1和EG-2未檢測出6種毒力基因;屎腸球菌Efm-1檢測出efa A、asal、ace、gel E共4種毒力基因;雞胚尿囊腔接菌后,存活雞胚未發(fā)現(xiàn)明顯病變,死亡雞胚有明顯的充血和出血病變。鶉雞腸球菌、小腸腸球菌、屎腸球菌的半數(shù)致死量分別為9.33×10～4CFU、6.10×10～6CFU、1.31×10～6CFU。提示不同種腸球菌其毒力基因攜帶數(shù)量、種類均有差異,且3種腸球菌致病性均較弱,其毒力基因攜帶情況與毒力未發(fā)現(xiàn)有明顯的關(guān)聯(lián)性。

參考文獻

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