蟾蜍靈對(duì) K562/VCR 長(zhǎng)春新堿耐藥白血病細(xì)胞系多藥耐藥的逆轉(zhuǎn)作用。

探討 Bufalin 對(duì)人白血病細(xì)胞系 K562/VCR 中長(zhǎng)春新堿獲得性多藥耐藥 （MDR） 的逆轉(zhuǎn)作用。
方法和結(jié)果：
通過(guò)甲基噻唑基四唑測(cè)定法測(cè)定蟾牛素的增殖抑制率和逆轉(zhuǎn)指數(shù) （RI）。流式細(xì)胞術(shù) （FCM） 測(cè)定 K562/VCR 細(xì)胞中阿霉素 （ADM） 的攝取、細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡率。用 Wright-Giemsa 染色觀察到細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化。免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè) P-glycoprotein （P-gp） 、多藥相關(guān)蛋白-1 （MRP1） 、 Bcl-xL 和 Bax 蛋白的表達(dá)。人白血病多重耐藥 K562/VCR 細(xì)胞對(duì) Bufalin 無(wú)交叉耐藥性。Bufalin 在 0.0002 、 0.001 和 0.005 μmol/L 濃度下的 RI 分別為 4.85 、 6.94 和 14.77。0.001 μmol/L Bufalin 預(yù)孵育 2 h 可使細(xì)胞內(nèi) ADM 熒光強(qiáng)度提高至 28.07% （P < 0.05） 并同時(shí)下調(diào) MRP1 表達(dá)，但對(duì) P-gp 蛋白無(wú)顯著影響。細(xì)胞周期分析顯示 Bufalin 處理后細(xì)胞凋亡率增加和 G2/M 期比例明顯降低。當(dāng)暴露于 0.01 μmol/L 蟾蜍靈時(shí)，可觀察到細(xì)胞凋亡的典型形態(tài)學(xué)變化。免疫細(xì)胞化學(xué)可檢測(cè) K562/VCR 細(xì)胞中 Bcl-xL 的下調(diào)和 Bax 表達(dá)的上調(diào)。
結(jié)論：
Bufalin 可部分逆轉(zhuǎn) K562/VCR 細(xì)胞的 MDR，可能通過(guò)改變 Bcl-xL/Bax 比值下調(diào) MRP1 表達(dá)和激活細(xì)胞凋亡途徑。

響應(yīng)蟾蜍靈素的兩種不同信號(hào)通路的協(xié)同相互作用誘導(dǎo)人白血病 U937 細(xì)胞凋亡。

蟾蜍素是中藥的一種活性成分 chan'su，可誘導(dǎo)人白血病 U937 細(xì)胞的典型細(xì)胞凋亡。
方法和結(jié)果：
當(dāng)在沒有血清的情況下用 10 （-8） M Bufalin 處理 U937 細(xì)胞時(shí)，絲裂原活化蛋白 （MAP） 激酶活性在處理開始后 6 h 顯著增加，并在 12 h 內(nèi)升高。在 MAP 激酶激活之前，發(fā)現(xiàn) Ras、Raf-1 和 MAP 激酶激酶的活性增加，但這些酶被 Bufalin 處理瞬時(shí)激活。這些結(jié)果表明，信號(hào)從 Ras、Raf-1 和 MAP 激酶依次傳遞到 MAP 激酶。與這種信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)相關(guān)，細(xì)胞中 cAMP 的濃度顯著降低，表明 Raf-1 也因蛋白激酶 A 磷酸化程度的降低而被激活。事實(shí)上，用毛喉素和 3-異丁基-1-甲基黃嘌呤預(yù)處理 U937 細(xì)胞，已知它們會(huì)增加細(xì)胞中 cAMP 的濃度，隨后用蟾蜍素處理導(dǎo)致 Raf-1 活性和 DNA 片段化降低。為了確認(rèn) MAP 激酶參與凋亡過(guò)程，在 U937 細(xì)胞中表達(dá) MAP 激酶激酶 1 的反義 cDNA。轉(zhuǎn)化體對(duì)響應(yīng) Bufalin 的 DNA 片段化和細(xì)胞死亡均具有顯著抗性。
結(jié)論：
我們的研究結(jié)果表明，響應(yīng) Bufalin 的 U937 細(xì)胞中 MAP 激酶持續(xù)激活的通路是參與誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的至少信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路之一。

蟾蜍素和蟾蜍素對(duì)雄激素依賴性和非依賴性前列腺癌細(xì)胞增殖的影響。

強(qiáng)心苷可在癌癥中誘導(dǎo)溶瘤作用。本研究旨在評(píng)估 Bufalin 和 cinobufagin 對(duì)名為 LNCaP 、 DU145 和 PC3 的前列腺癌細(xì)胞系增殖的影響。
方法和結(jié)果：
通過(guò) MTT 法測(cè)量細(xì)胞增殖。通過(guò)乳酸脫氫酶測(cè)定細(xì)胞毒作用。細(xì)胞內(nèi)鈣濃度 （[Ca（2+）]（i）） 由雙波長(zhǎng)光譜儀系統(tǒng)測(cè)量。進(jìn)行 TUNEL 測(cè)定和流式細(xì)胞術(shù)以測(cè)量凋亡細(xì)胞的百分比。比色測(cè)定法用于測(cè)量 caspase 活性。培養(yǎng) 2-4 天后，Bufalin 和 cinobufagin 以 0.1、1 或 10 μM 的劑量抑制癌細(xì)胞的增殖。Bufalin 和 cinobufagin 對(duì) DU145 和 LNCaP 細(xì)胞的細(xì)胞毒性呈劑量依賴性。培養(yǎng) 24 小時(shí)后，蟾蜍素或蟾蜍素增加癌細(xì)胞中的 [Ca（2+）]（i） 和細(xì)胞凋亡，以及 DU145 和 PC3 細(xì)胞中的半胱天冬酶 3 活性以及 LNCaP 細(xì)胞中的半胱天冬酶 9 活性。
結(jié)論：
Bufalin 和 cinobufagin 可能抑制與 [Ca（2+）]（i） 和細(xì)胞凋亡持續(xù)升高相關(guān)的前列腺癌細(xì)胞系的增殖。