IHC 抗體是什么

IHC，即免疫組織化學(xué)，是一項(xiàng)將免疫學(xué)與傳統(tǒng)組織化學(xué)巧妙結(jié)合的技術(shù)。它利用抗原抗體的特異性結(jié)合反應(yīng)，來(lái)檢測(cè)和定位組織和細(xì)胞中的某些化學(xué)物質(zhì)。

免疫組織化學(xué)具有高度的敏感性和特異性。它能夠?qū)⑿螒B(tài)學(xué)改變與功能、代謝變化相結(jié)合，直接定位蛋白質(zhì)和多肽類物質(zhì)的存在。其全過程包括抗原的提取與純化、免疫動(dòng)物或細(xì)胞融合制備特異性抗體及抗體純化、將顯色劑與抗體結(jié)合形成標(biāo)記抗體、標(biāo)本制備、免疫細(xì)胞化學(xué)反應(yīng)以及呈色反應(yīng)、最后觀察結(jié)果。

在生物醫(yī)學(xué)研究中，免疫組織化學(xué)染色有著廣泛的作用，涉及多個(gè)研究領(lǐng)域。例如，可以確定細(xì)胞類型和形態(tài)，通過標(biāo)記性蛋白的特異性抗體確定細(xì)胞種類，對(duì)于在光鏡下不易辨認(rèn)的細(xì)胞，可通過對(duì)胞質(zhì)內(nèi)特定蛋白實(shí)施免疫組化染色，清楚顯示細(xì)胞外形輪廓；還能辨認(rèn)細(xì)胞產(chǎn)物的來(lái)源，利用細(xì)胞產(chǎn)物為抗原制備抗體，對(duì)組織細(xì)胞實(shí)施免疫組織化學(xué)染色，確定細(xì)胞產(chǎn)物來(lái)源，研究細(xì)胞分泌功能及對(duì)內(nèi)分泌腫瘤作功能分類等；可以確定細(xì)胞的分化程度，根據(jù)不同細(xì)胞表達(dá)的標(biāo)志性蛋白鑒定細(xì)胞分化程度；可追蹤神經(jīng)纖維束和它的投射區(qū)，常與軸漿運(yùn)輸示蹤法相結(jié)合研究神經(jīng)元之間的聯(lián)系；在臨床病理中也有諸多應(yīng)用，如鑒定病變性質(zhì)、發(fā)現(xiàn)微小病灶、探討腫瘤起源或分化表型、確定腫瘤分期、指導(dǎo)治療和預(yù)后、輔助疾病診斷和分類、尋找感染病因等。

免疫組織化學(xué)技術(shù)也有其局限性，組織細(xì)胞內(nèi)的待測(cè)物質(zhì)要有抗原性，且需要達(dá)到一定濃度才可檢出，檢出的免疫反應(yīng)陽(yáng)性蛋白不能確定是細(xì)胞新合成的蛋白還是通過細(xì)胞間運(yùn)輸而來(lái)的蛋白。

IHC 抗體的作用

1. 在臨床上常被用于惡性腫瘤的診斷與鑒別診斷，確定轉(zhuǎn)移性惡性腫瘤的原發(fā)部位以及對(duì)某類腫瘤進(jìn)行進(jìn)一步的病理分型等。

IHC 抗體在臨床上具有重要作用。首先，它常被用于惡性腫瘤的診斷與鑒別診斷。例如，在肺腺癌與肺鱗癌的鑒別中，TTF - 1 / P63 組合基本可以滿足鑒別需求。此外，對(duì)于一些轉(zhuǎn)移性惡性腫瘤，IHC 抗體可以確定其原發(fā)部位。中科院合肥物質(zhì)科學(xué)研究院的谷紅倉(cāng)研究員及其團(tuán)隊(duì)開發(fā)的新方法，可根據(jù)福爾馬林固定石蠟包埋樣本的 DNA 甲基化信息來(lái)預(yù)測(cè)轉(zhuǎn)移性癌癥的原發(fā)部位，而傳統(tǒng)的 “金標(biāo)準(zhǔn)” 免疫組化（IHC）技術(shù)雖被廣泛應(yīng)用，但易受抗體質(zhì)量及人為因素影響，僅能判定 50 - 65% 的轉(zhuǎn)移癌的原發(fā)部位。同時(shí)，IHC 抗體還能對(duì)某類腫瘤進(jìn)行進(jìn)一步的病理分型，如乳腺癌通過 ER、PR、HER - 2、Ki - 67 表達(dá)情況來(lái)細(xì)分病理分型；軟組織腫瘤也可利用多種標(biāo)志進(jìn)行免疫組化研究，確定其正確組織學(xué)分類。

2. 通過抗原抗體結(jié)合反應(yīng)檢測(cè)抗原和抗體，利用抗體與目標(biāo)抗原相互作用的原理，可視化目標(biāo)抗原在組織中的位置和表達(dá)水平。

IHC 檢測(cè)是一種利用抗原抗體的特異性結(jié)合反應(yīng)來(lái)檢測(cè)和定位組織和細(xì)胞中的某些化學(xué)物質(zhì)的技術(shù)。其原理是抗原與抗體特異性結(jié)合后再通過化學(xué)反應(yīng)使標(biāo)記抗體顯色，從而確定組織細(xì)胞內(nèi)的抗原，并對(duì)其進(jìn)行定位和定性。具體來(lái)說(shuō)，先將組織或細(xì)胞中的某種化學(xué)物質(zhì)提取出來(lái)作為抗原，通過免疫動(dòng)物后獲得特異性抗體，再用此抗體去探測(cè)組織或細(xì)胞中的同類抗原物質(zhì)，最后借助組織化學(xué)的方法將抗原抗體結(jié)合的部位顯示出來(lái)。在操作過程中，如免疫組化（SP 法）操作步驟包括切片常規(guī)脫蠟至水、緩沖液洗、去除內(nèi)源性過氧化物酶、再次緩沖液洗、封閉非特異性背景染色、再次緩沖液洗、滴加一抗工作液、再次緩沖液洗、滴加增強(qiáng)子、再次緩沖液洗、滴加酶標(biāo)二抗、再次緩沖液洗、滴加顯色劑、自來(lái)水充分沖洗、復(fù)染、脫水、透明、封片等。多克隆抗體在免疫組織化學(xué)中應(yīng)用廣泛，常用于組織切片的染色，幫助識(shí)別和定位特定的蛋白質(zhì)，對(duì)腫瘤的分類和預(yù)后判斷具有重要作用。

常見的 IHC 抗體有哪些

1. 介紹激素與生長(zhǎng)因子及其受體相關(guān)的 IHC 常用抗體，如 ACTH、AR、Calcitonin、C-erbB-2、EGFR、ER、beta-hCG 等。

• • ACTH（促腎上腺皮質(zhì)激素）：由垂體前葉細(xì)胞分泌，主要用于垂體腫瘤的功能性分類、原發(fā)性和轉(zhuǎn)移性垂體瘤的診斷和鑒別診斷。部分神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤中 ACTH 染色陽(yáng)性，如嗜鉻細(xì)胞瘤、類癌等。

• • AR（雄激素受體）：在前列腺癌的發(fā)生中起著重要作用，其表達(dá)與組織學(xué)分型呈一定相關(guān)性，高分化腫瘤 AR 的表達(dá)高于低分化腫瘤。AR 陽(yáng)性者對(duì)抗激素及去勢(shì)治療的效果好，在睪丸、前列腺中染色陽(yáng)性，也可用于乳腺癌、子宮內(nèi)膜癌中雄激素水平的檢測(cè)。

• • Calcitonin（降鈣素）：是血液中能降低鈣含量的一種多肽，由甲狀腺濾泡旁細(xì)胞（C 細(xì)胞）分泌。此抗體主要用于甲狀腺 C 細(xì)胞增生、甲狀腺髓樣癌的診斷及某些神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤的研究。

• • C-erbB-2（HER-2/neu）：編碼具有酪氨酸激酶活性的跨膜糖蛋白，在 20 - 30% 的乳腺癌病人中可檢測(cè)到過表達(dá)。此抗體主要作為判斷乳腺癌、卵巢癌、子宮內(nèi)膜癌及消化道腫瘤預(yù)后的參考指標(biāo)。

• • EGFR（表皮生長(zhǎng)因子受體）：是分子量為 170kDa 的膜蛋白，表達(dá)于多種正常組織。乳腺癌病人 EGFR 的過度表達(dá)預(yù)示生存期短、激素療效差；對(duì)胃癌病人表明預(yù)后差，并可指導(dǎo)結(jié)直腸癌靶向藥物西妥昔單抗的治療。

• • ER（雌激素受體）：是乳腺生長(zhǎng)和分化的重要調(diào)節(jié)因子，乳腺癌組織中雌激素受體是判斷預(yù)后和預(yù)測(cè)內(nèi)分泌治療敏感性的重要參數(shù)，存在于正常子宮內(nèi)膜、平滑肌細(xì)胞及正常乳腺的上皮細(xì)胞。

• • beta-hCG（絨毛膜促性腺激素 β 亞基）：由胎盤合體滋養(yǎng)層細(xì)胞產(chǎn)生，正常妊娠的絨毛滋養(yǎng)細(xì)胞染色陽(yáng)性，可用于絨毛膜上皮癌、葡萄胎和惡性葡萄胎的診斷，可檢測(cè)滋養(yǎng)層細(xì)胞來(lái)源的腫瘤和生殖細(xì)胞腫瘤，異位表達(dá)提示可能為腫瘤浸潤(rùn)或轉(zhuǎn)移行為。

2. 細(xì)數(shù)肺癌療效預(yù)測(cè)標(biāo)志物中關(guān)鍵的 IHC 抗體，包括 EGFR、PD-1/PD-L1、C-MET、CD56、CD20、CD163 等。

• • EGFR：在 NSCLC 治療方面，表皮生長(zhǎng)因子受體酪氨酸激酶抑制劑是攜帶 EGFR 突變基因的晚期非小細(xì)胞肺癌患者的優(yōu)先選擇。針對(duì) EGFR 的免疫組化檢測(cè)對(duì) NSCLC 治療和預(yù)后評(píng)估具有重要意義。

• • PD-1/PD-L1：用抗 PD-1 或抗 PD-L1 抗體進(jìn)行免疫治療可釋放先天免疫系統(tǒng)的殺傷作用，對(duì)腫瘤生長(zhǎng)做出免疫反應(yīng)。但目前 PD-1 和 PD-L1 免疫組化檢測(cè)存在產(chǎn)品及檢測(cè)方法未標(biāo)準(zhǔn)化的問題。

• • C-MET：基因?qū)儆谠┗?，在肺癌中易被檢出。C-MET 與肺癌臨床分期、分化程度以及肺癌患者預(yù)后不良相關(guān)，可根據(jù)過表達(dá)方式明確肺癌的分化程度和分期，還可作為治療靶點(diǎn)。

• • CD56：是表達(dá)于 NK 細(xì)胞和小部分活化的 T 淋巴細(xì)胞及神經(jīng)外胚層起源的細(xì)胞的分子抗體，為肺神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤首選的特異性標(biāo)志物。

• • CD20：表達(dá)于除漿細(xì)胞外的發(fā)育分化各階段的 B 細(xì)胞表面，B 細(xì)胞被認(rèn)為是肺癌患者癌癥進(jìn)展延遲、治療反應(yīng)改善和生存延長(zhǎng)的陽(yáng)性預(yù)測(cè)因子。

• • CD163：肺癌腫瘤微環(huán)境中，腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞根據(jù)功能可分為 M1 型和 M2 型，以免疫抑制巨噬細(xì)胞（M2）為主，M2 巨噬細(xì)胞可促進(jìn)腫瘤發(fā)展，CD163 是肺癌巨噬細(xì)胞極化 M2 型標(biāo)志物。

3. Cell Marque IHC 抗體介紹，包括兔抗糜蛋白酶多克隆抗體、抗胰蛋白酶兔多克隆抗體、促腎上腺皮質(zhì)激素兔多克隆抗體等。

• • A-1 - 兔抗糜蛋白酶多克隆抗體：α-1 抗糜蛋白酶可抑制絲氨酸蛋白酶，此抗體可用于鑒定組織細(xì)胞及其衍生腫瘤中 α-1 抗胰蛋白酶的存在。

• • A-1 - 抗胰蛋白酶兔多克隆抗體：α-1 - 抗胰蛋白酶是絲氨酸蛋白酶超家族中的蛋白酶抑制劑，可用于檢測(cè)肝臟病變和組織細(xì)胞腫瘤中 α-1 - 抗蛋白酶的積聚。

• • 促腎上腺皮質(zhì)激素兔多克隆抗體：促腎上腺皮質(zhì)激素由垂體前葉合成和分泌，此抗體可用于垂體腫瘤性和非腫瘤性疾病的研究。

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