背景^[1-7]

小鼠MAPK信號(hào)通路PCR芯片可以測(cè)定多個(gè)與MAPK信號(hào)通路有關(guān)的基因，這些基因包括MKKK、MKK、MAPK家族成員，以及MAPK信號(hào)通路的轉(zhuǎn)錄因子及其誘導(dǎo)表達(dá)的基因，Raf調(diào)節(jié)蛋白、MEKK1相互作用蛋白和Erk1/2調(diào)節(jié)的細(xì)胞周期調(diào)節(jié)蛋白也包含在內(nèi)，此外還含有支架蛋白和錨定蛋白。

MAPK，絲裂原活化蛋白激酶（mitogen-activatedproteinkinases，MAPKs）是細(xì)胞內(nèi)的一類絲氨酸／蘇氨酸蛋白激酶。研究證實(shí)，MAPKs信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路存在于大多數(shù)細(xì)胞內(nèi)，在將細(xì)胞外刺激信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)至細(xì)胞及其核內(nèi)，并引起細(xì)胞生物學(xué)反應(yīng)（如細(xì)胞增殖、分化、轉(zhuǎn)化及凋亡等）的過程中具有至關(guān)重要的作用。研究表明，MAPKs信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在細(xì)胞內(nèi)具有生物進(jìn)化的高度保守性，在低等原核細(xì)胞和高等哺乳類細(xì)胞內(nèi)，目前均已發(fā)現(xiàn)存在著多條并行的MAPKs信號(hào)通路，不同的細(xì)胞外刺激可使用不同的MAPKs信號(hào)通路，通過其相互調(diào)控而介導(dǎo)不同的細(xì)胞生物學(xué)反應(yīng)。

MAPK信號(hào)通路成員：MKKK，MKK，MAPK；在未受刺激的細(xì)胞內(nèi)，MAPK處于靜止?fàn)顟B(tài)。細(xì)胞受到生長(zhǎng)因子或其他因素刺激后，MAPK接收MKK和MKKK的活化信號(hào)而被激活，表現(xiàn)為逐級(jí)磷酸化，如生長(zhǎng)因子、細(xì)胞因子、射線、滲透壓以及體液流過細(xì)胞表面時(shí)產(chǎn)生的切應(yīng)力等因素都可以激活MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路。

應(yīng)用^[8][9]

用于小鼠腦缺血再灌注損傷細(xì)胞凋亡與MAPK信號(hào)通路影響的實(shí)驗(yàn)研究:

腦血管疾病是目前嚴(yán)重危害人類健康的主要疾病之一,在我國(guó)每年死于腦血管病的患者多于心臟病及癌癥,居三大死因之首。缺血性腦血管病是威脅人類的常見病、多發(fā)病,因此尋找有效的治療手段并闡釋其機(jī)理仍然是目前腦科學(xué)領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)也稱為應(yīng)激活化蛋白激酶(stress activated protein kinase,SAPK),是MAPK家族的重要成員,屬于進(jìn)化上保守的絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶,是中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)主要的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路之一。

JNK信號(hào)通路可被細(xì)胞因子、生長(zhǎng)因子、應(yīng)激等多種因素激活,參與細(xì)胞增殖與分化、細(xì)胞形態(tài)維持、細(xì)胞骨架構(gòu)建、細(xì)胞凋亡等多種生物反應(yīng)。JNK在細(xì)胞應(yīng)激反應(yīng)中起重要作用,能被多種細(xì)胞外應(yīng)激信號(hào)激活,因而也被稱為應(yīng)激活化蛋白激酶。選用JNK基因敲除小鼠36只,按隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分為假手術(shù)組、模型組和電針組,其中假手術(shù)組、模型組和電針組每組又分為2h(小時(shí))、1d(天)、3d(天)三個(gè)時(shí)間段組,共9小組,每小組4只小鼠。

模擬臨床腦梗塞的證型,選擇以基因敲除小鼠大腦中動(dòng)脈閉塞(middle cerebral artery oeelusion,MCAO)為模型,采用臨床常用的對(duì)腦缺血及其后遺癥有確定療效的針刺和電刺激結(jié)合起來的電針治療局灶性腦缺血。針對(duì)MAPK通路在腦缺血中作用途徑、作用機(jī)制這一關(guān)鍵問題,從多環(huán)節(jié)、多層次、多靶點(diǎn)上觀察電針對(duì)MAPK通路的影響及電針對(duì)腦缺血后海馬神經(jīng)元的保護(hù)作用。

JNK是位于細(xì)胞質(zhì)的絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶,含有雙磷酸化功能區(qū)Thr-Pro-Tyr,因JNK可以結(jié)合c-Jun氨基端活化結(jié)構(gòu)域,并磷酸化其第63位和73位絲氨酸殘基而被命名為JNK。迄今已發(fā)現(xiàn)了由JNK1、JNK2JNK3的不同剪接形式組成的10種同源異型蛋白,JNK1和JNK2的表達(dá)具有廣泛性,JNK3僅在大腦、心臟和睪丸中表達(dá)。

目的：本實(shí)驗(yàn)是想通過科學(xué)方法探索腦缺血/再灌注后腦內(nèi)MAPK家族信號(hào)通路的調(diào)控及電針干預(yù)作用的影響,從而進(jìn)一步了解電針治療對(duì)腦缺血/再灌注后腦內(nèi)MAPK家族信號(hào)系統(tǒng)調(diào)控機(jī)制及細(xì)胞凋亡的影響。對(duì)“針刺刺激-復(fù)合信號(hào)調(diào)控-良性修養(yǎng)機(jī)制啟動(dòng)是其腦缺血/再灌注后治療的關(guān)鍵作用機(jī)制之一”的科學(xué)假說加以探討,對(duì)研究電針對(duì)腦缺血/再灌注治療在干預(yù)機(jī)制有一定的參考意義。

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