背景^[1-3]

亮綠SF染色液(1%)別稱(chēng)是酸性綠5，Light green SF yellowish，是一種化學(xué)品，又稱(chēng)亮綠SF（淡黃）、亮綠2G、亮綠S、酸性綠等，分子式C37H34N2Na2O9S3，分子量為792.84，易溶于水呈綠色溶液。亮綠SF染色液(1%)屬于漿質(zhì)染色劑可用于動(dòng)物組織染色或與鐵蘇木素或其他核染料作對(duì)比染色。在植物組織學(xué)中作細(xì)胞質(zhì)和纖維染色和酸性品紅共染花粉管。亮綠SF染色液(1%)主要由亮綠SF、磷酸鹽、去離子水等組成，根據(jù)不同組織染色而異。

亮綠SF水中溶解度:200 g/l(20°C)，溶于醇用作細(xì)胞學(xué)上的復(fù)染色，或Gomori's步驟中用作苯胺蘭的替代物。

淺綠色三苯甲烷(LGSFY)是酸性三苯甲烷染料的二鈉鹽。它還稱(chēng)為淺綠、麗絲胺綠SF、食品綠2、綠色205號(hào)、酸性綠、酸性亮綠5、酸性亮綠SF。除伊紅Y和bismark brown Y外，LGSFY是巴氏染色的重要成分。淺綠色SF淡黃色是膠原蛋白的組織學(xué)染色劑，也是食品和飲料允許使用的著色劑。

亮綠SF染色液(1%)通常用作核染色的細(xì)胞質(zhì)復(fù)染色，如番紅和富爾根染液。在組織病理學(xué)中，用于膠原纖維馬森三色染色、巴氏染色細(xì)胞學(xué)多色染色和組織切片微生物的特沃特染色。它是用于分化垂體分泌細(xì)胞的多色染色法的組成部分。淺綠色SF也能對(duì)植物細(xì)胞的纖維素細(xì)胞壁染色。

使用方法：按實(shí)驗(yàn)具體要求操作。一般染色1～3min，根據(jù)不同組織染色而異。

亮綠SF染色液(1%)

亮綠SF染色液(1%)優(yōu)點(diǎn)：

顏色鮮明：亮綠SF染色液染色后綠色明顯，在顯微鏡下可更清楚地識(shí)別細(xì)胞結(jié)構(gòu)或組織成分。

專(zhuān)一性強(qiáng)：對(duì)某些組織成分，如膠原纖維，有較好的特異性，因此在特定場(chǎng)景下的組織染色效果突出。

方便使用：操作程序簡(jiǎn)單，染色時(shí)間較短。

穩(wěn)定性好：室溫避光保存，有效期12個(gè)月。

應(yīng)用^[4][5]

亮綠SF染色液(1%)可以用于CsA對(duì)大鼠腦缺血再灌注損傷OX-42、iNOS表達(dá)的影響及對(duì)髓鞘的保護(hù)作用研究

通過(guò)采用改良線栓法制備大鼠局灶性腦缺血再灌注模型,用CsA作為干預(yù)藥物治療,采用免疫組化SP染色技術(shù),動(dòng)態(tài)觀察腦缺血再灌注后大鼠海馬CA1區(qū)OX-42、iNOS以及胼胝體區(qū)髓鞘堿性蛋白(MBP)的表達(dá)情況,變色酸2R-亮綠SF（亮綠SF染色液(1%)）雙重染色法髓鞘染色,觀察急性腦缺血再灌注損傷后髓鞘的變化,及CsA的干預(yù)作用,并對(duì)大鼠神經(jīng)行為學(xué)進(jìn)行評(píng)分,為探索腦缺血的神經(jīng)保護(hù)劑的應(yīng)用,提供理論依據(jù)和新的思路。

材料與方法1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組及給藥方法成年健康Sprague-Dawley(SD)大鼠72只,隨機(jī)分為3組,假手術(shù)組、模型組和環(huán)孢素A組,每組24只,每組分為4個(gè)亞組。環(huán)孢素A組手術(shù)后每天腹腔注射環(huán)孢素A(20mg/kg),模型組和假手術(shù)組每日腹腔注射等體積的生理鹽水2模型制作和入選標(biāo)準(zhǔn)采用改良線栓法制備大鼠局灶性腦缺血再灌注模型。模型組和環(huán)孢素A組缺血2小時(shí)進(jìn)行再灌注,假手術(shù)組僅分離頸總動(dòng)脈。動(dòng)物麻醉蘇醒后,參照Z(yǔ)ea-longa等評(píng)分標(biāo)準(zhǔn),1-3分為入選對(duì)象。3腦組織切片的制備大鼠心臟灌注后斷頭取腦后,常規(guī)固定、脫水、石蠟包埋。制成4μm和6μm的切片,分別用于免疫組化染色和變色酸2R-亮綠SF（亮綠SF染色液(1%)）雙重染色法髓鞘染色。4檢測(cè)指標(biāo)(1)參照Z(yǔ)ea-longa等評(píng)分標(biāo)準(zhǔn),對(duì)大鼠神經(jīng)行為學(xué)進(jìn)行評(píng)分；(2)髓鞘染色,光學(xué)顯微鏡下觀察髓鞘變化；(3)采用SP法進(jìn)行免疫組化染色,觀察大鼠海馬CA1區(qū)OX-42、iNOS以及胼胝體區(qū)MBP的表達(dá)。5圖像分析每個(gè)標(biāo)本隨機(jī)選取5個(gè)完整而不重疊的高倍鏡視野(×400),測(cè)定每個(gè)視野下的陽(yáng)性區(qū)平均灰度值,以5個(gè)視野的平均灰度值的平均值作為該例的測(cè)量值。應(yīng)用圖象分析系統(tǒng)進(jìn)行檢測(cè)。6統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS12.0統(tǒng)計(jì)軟件處理,實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±S)表示,采用單因素方差分析,組間比較采用LSD檢驗(yàn),α=0.05為顯著性檢驗(yàn)性水準(zhǔn)。

結(jié)果1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物一般情況及神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分假手術(shù)組：無(wú)神經(jīng)系統(tǒng)功能缺陷,動(dòng)作敏捷,反應(yīng)靈敏,自由食水；模型組：精神萎靡,食欲不振,自主活動(dòng)少,不同程度出現(xiàn)左側(cè)霍納氏征,追尾征以及強(qiáng)迫姿勢(shì)；環(huán)孢素A組較模型組情況改善,且神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分優(yōu)于模型組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2變色酸2R-亮綠SF（亮綠SF染色液(1%)）雙重染色法髓鞘染色結(jié)果顯示,假手術(shù)組髓鞘染色的切面紅綠相間,類(lèi)似魚(yú)骨刺狀,排列緊密,髓鞘為紅色,軸索呈綠色。模型組1d、3d與假手術(shù)組相比無(wú)明顯差異,7d、14d胼胝體髓鞘染色疏松、空泡形成,髓鞘密度明顯降低。環(huán)孢素A組7d、14d胼胝體髓鞘密度較假手術(shù)組也明顯降低,但好于模型組。

參考文獻(xiàn)

[1]Neuroprotection in stroke by complement inhibition and immunoglobulin therapy[J].T.V.Arumugam;;T.M.Woodruff;;J.D.Lathia;;P.K.Selvaraj;;M.P.Mattson;;S.M.Taylor.Neuroscience,2009(3)

[2]Nimodipine can improve cerebral metabolism and outcome in patients with severe head trauma[J].Adem Aslan;;Mustafa Gurelik;;Mustafa Cemek;;Hakan Murat Goksel;;Mehmet Emin Buyukokuroglu.Pharmacological Research,2008(2)

[3]T-and B-Cell-Deficient Mice with Experimental Stroke have Reduced Lesion Size and Inflammation[J].Patricia D Hum;;Sandhya Subramanian;;Susan M Parker;;Michael E Afentoulis;;Laurie J Kaler;;Arthur A Vandenbark;;Halina Offner.Journal of Cerebral Blood Flow&Metabolism.2007

[4]Calcineurin-independent inhibition of the delayed rectifier K+current by the immunosuppressant FK506 in rat hippocampal neurons[J].Yong Yu;;Xue-Qin Chen;;Yao-Yuan Cui;;Guo-Yuan Hu.Brain Research,2007

[5]杜家琇.CsA對(duì)大鼠腦缺血再灌注損傷OX-42、iNOS表達(dá)的影響及對(duì)髓鞘的保護(hù)作用研究[D].鄭州大學(xué),2011.