概述^[1][2]

3T3-E1/鼠胚成骨細(xì)胞3T3-E1又叫MC3T3-E1細(xì)胞，用途：只可用于科研。

細(xì)胞生長(zhǎng)條件： 

應(yīng)用^[1]

3T3-E1/鼠胚成骨細(xì)胞3T3-E1可用于氧化應(yīng)激測(cè)試。

CN201510396863.X提供一種成骨細(xì)胞氧化應(yīng)激測(cè)試方法，特別是針對(duì)成骨細(xì)胞MC3T3E1細(xì)胞的氧化應(yīng)激測(cè)試方法，該方法將成骨細(xì)胞MC3T3-E1細(xì)胞為對(duì)象，有效測(cè)試出氧化應(yīng)激刺激能引起細(xì)胞的死亡，并損害成骨細(xì)胞的正常功能，抑制成骨細(xì)胞的分化，有助于闡明氧化應(yīng)激在骨質(zhì)疏松癥發(fā)病機(jī)制中的作用，為抗骨質(zhì)疏松癥新藥的研制提供一定的理論依據(jù)。衰老是生物隨著時(shí)間的推移，發(fā)生的一個(gè)不可逆的過程。它是復(fù)雜的自然現(xiàn)象，表現(xiàn)為結(jié)構(gòu)和機(jī)能衰退，適應(yīng)性和抵抗力減退，更易感染疾病。隨著年齡的增加，自由基的產(chǎn)生增加。在衰老及其并發(fā)癥中，體內(nèi)增加的活性氧(Reactive oxygen species,ROS)扮演著重要的角色。骨質(zhì)疏松癥是老年性疾病，患病率與年齡成正比。以往，雌激素缺乏被認(rèn)為是骨質(zhì)疏松癥發(fā)生的主要機(jī)制。然而骨質(zhì)的流失開始于三十歲，而且補(bǔ)充雌激素并不能有效治療老齡性骨質(zhì)疏松。衰老引起的骨質(zhì)丟失是不依賴性激素的，氧化應(yīng)激起了非常大的作用。氧化應(yīng)激可直接或間接地影響骨吸收與骨形成的過程。為了模仿衰老中ROS對(duì)骨代謝的影響，本發(fā)明對(duì)前成骨細(xì)胞MC3T3-E1進(jìn)行H2O2刺激誘導(dǎo)氧化應(yīng)激反應(yīng)。

本發(fā)明的目的可以通過以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)：

一種MC3T3-E1成骨細(xì)胞氧化應(yīng)激測(cè)試方法，其步驟包括，

(1)將α-MEM培養(yǎng)液37-40℃預(yù)熱20-25分鐘；然后將α-MEM培養(yǎng)液重懸MC3T3-E1細(xì)胞，均勻，接種于培養(yǎng)皿中，搖勻，放入37℃、5％CO2培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)；

(2)每2-3天換一次液，3-5天后細(xì)胞達(dá)到80-90％匯合時(shí)棄去原培養(yǎng)液，胎牛血清洗凈后，加入1ml濃度為0.25％Trypsin-EDTA放入37℃、5％CO2培養(yǎng)箱中1-2分鐘，加入2ml培液終止消化，制成MC3T3-E1細(xì)胞懸液；

(3)取生長(zhǎng)狀態(tài)良好的MC3T3-E1細(xì)胞懸液接種于六孔板中，α-MEM培 養(yǎng)液預(yù)培養(yǎng)24小時(shí)使細(xì)胞貼壁；

(4)取步驟(3)中的濃度為0.1-1.0mmol/L的成骨細(xì)胞液，培養(yǎng)20-28小時(shí)后加入濃度為0.1-1.0mmol/L的過氧化氫溶液；

(5)去除原有α-MEM培養(yǎng)液，用正常α-MEM培養(yǎng)液清洗2-4次后再用PBS清洗1-3次，每孔加入10ul的CCK-8毒性/增殖檢測(cè)試劑，37℃避光孵育3小時(shí)；

(6)在450nm波長(zhǎng)處，測(cè)定各孔光吸收值即可。

所述α-MEM培養(yǎng)液中含有質(zhì)量濃度為10％的胎牛血清和質(zhì)量濃度為1％的抗生素。

所述抗生素為青鏈霉素。

所述步驟(1)中的培養(yǎng)皿的厚度為10cm。

所述步驟(1)均勻的方式為十字結(jié)合八字法。

所述步驟(3)中的MC3T3-E1細(xì)胞懸液接種密度為6x104/cm²。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果在于：

1、本發(fā)明采用成骨細(xì)胞MC3T3-E1細(xì)胞為對(duì)象，有效測(cè)試出氧化應(yīng)激刺激能引起細(xì)胞的死亡，并損害成骨細(xì)胞的正常功能，抑制成骨細(xì)胞的分化，有助于闡明氧化應(yīng)激在骨質(zhì)疏松癥發(fā)病機(jī)制中的作用，為抗骨質(zhì)疏松癥新藥的研制提供一定的理論依據(jù)。

2、本測(cè)試方法簡(jiǎn)單、有效，便于實(shí)施。

主要參考資料

[1] CN201510396863.X 一種MC3T3-E1成骨細(xì)胞氧化應(yīng)激測(cè)試方法

[2] MC3T3-E1 細(xì)胞說明書