背景及概述^[1]

核酸內(nèi)切酶是水解酶類中許多酶的共有名稱(EC3.1.21～31)。但各有其專一性，它們催化水解多核苷酸(例如脫氧核糖核酸酶，脫氧核糖核酸內(nèi)切酶，核糖核酸內(nèi)切酶等)。該酶類對于DNA和RNA的代謝和修復(fù)十分重要。核糖核酸酶H(RNaseH)是1種廣泛存在于原核細(xì)胞和真核細(xì)胞中的功能酶，它能有效降解RNA和DNA雜交鏈中的RNA鏈，為常用的工具酶之一。Miller等人在1973年首次從大腸桿菌中發(fā)現(xiàn)RNaseH隨后RNaseH被克隆和定位。1990年Itaya，M.又成功證明了大腸桿菌K-12中存在第2種RNaseH(RNaseHII)，同樣具有降解RNA-DNA雜交鏈中RNA的功能。現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)自然界主要存在兩類RNaseH：Ñ型和Ò型。其中I型包括細(xì)菌RNaseHI、人的RNaseHII和逆轉(zhuǎn)錄酶的逆轉(zhuǎn)錄RNaseH結(jié)構(gòu)域；而細(xì)菌RNaseHII和HIII，archaealRNaseHII、和人RNaseHI等都屬于Ò型RNaseH。有些生物體細(xì)胞基因組可能存在多個RNaseH(rnh)基因，但是通常只有一個表達(dá)RNaseH蛋白。

通過序列比對發(fā)現(xiàn)I型和II型的序列差異明顯，比如大腸桿菌的兩類RNaseH僅有17%的序列相似，這些酶的序列差異表明它們在細(xì)胞中的功能不同，實驗證明I型RNaseH的實際功能與RNA轉(zhuǎn)錄和DNA修復(fù)有關(guān)。雖然有關(guān)RNaseH功能的研究已取得了進(jìn)展，但是對RNaseH的細(xì)胞類似物的功能還知之甚少。RnaseH核酸內(nèi)切酶是一種特異性切割RNA/DNA雙鏈中的核糖核苷酸的核酸內(nèi)切酶，在調(diào)節(jié)免疫防御過程及維持真核生物基因組穩(wěn)定方面具有重要意義?；贒NA誘導(dǎo)的聚噻吩構(gòu)象變化，根據(jù)PMNT在DNA/PMNT二聚體和DNA/miRNA/PMNT三元復(fù)合物中構(gòu)象和顏色的變化可方便地檢測序列特異性的miRNA。MiRNA濃度在0.05-1.0μmol/L范圍內(nèi)與吸收比率成線性關(guān)系。該法可用普通的分光光度計甚至用肉眼可視法檢測，這可以大大降低分析成本、提高分析的效率。同時結(jié)合RnaseH核酸內(nèi)切酶的降解反應(yīng)，通過測定適量的RnaseH核酸內(nèi)切酶在一定的降解時間內(nèi)的吸收比率，建立了RnaseH核酸內(nèi)切酶活性的檢測。

主要參考資料

[1] 診斷學(xué)大辭典

[2] 基于陽離子共軛聚合物的核酸及單核苷酸多態(tài)性的均相檢測