背景及概述^[1]

核酸內(nèi)切酶是水解酶類中許多酶的共有名稱(EC3.1.21～31)。但各有其專一性，它們催化水解多核苷酸(例如脫氧核糖核酸酶，脫氧核糖核酸內(nèi)切酶，核糖核酸內(nèi)切酶等)。該酶類對(duì)于DNA和RNA的代謝和修復(fù)十分重要。

RNaseA核酸內(nèi)切酶是一種水解核糖核酸的酶。白色結(jié)晶或凍干粉末，也有50%甘油的稠狀溶液。對(duì)濕敏感。極易溶于水。酶反應(yīng)：專一地催化核糖核酸的核糖部分3′和5′磷酸二酯鍵的裂開，形成具有2′，3′-環(huán)一磷酸衍生物寡聚核苷酸。水溶液在25℃以下相當(dāng)穩(wěn)定，穩(wěn)定范圍pH2～4.5。最適pH7.7。最適溫度65℃。等電點(diǎn)(pI)7.8。比旋光度[α]25D-0.47°(以每mG氮計(jì)，c=5，水中)。抑制劑有0.0005mol/L鎂(MG2+)、脫氧核糖核酸(競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑)、變性脫氧核糖核酸(比天然的更有效)。RNaseA核酸內(nèi)切酶來(lái)源于牛胰，為高度專一性核酸內(nèi)切酶，可特異攻擊RNA上嘧啶核苷酸的C′-3上的磷酸根和相鄰核苷酸的C′-5之間的鍵，產(chǎn)物為3′-嘧啶單核苷酸或以3′嘧啶核苷酸結(jié)尾的低聚核苷酸。可除去DNA：RNA或RNA：RNA雜合體中未雜交的RNA區(qū);可用來(lái)確定DNA或RNA中單堿基突變的位置，用標(biāo)記了的RNA探針與待檢含單堿基置換的DNA或RNA退火，RNA：RNA或RNA：DNA中的錯(cuò)配堿基可被RNaseA切割。RNaseA核酸內(nèi)切酶被廣泛用來(lái)去除DNA樣品中的RNA。RNaseA核酸內(nèi)切酶配制方法為不含DNA酶的RNaseA溶液的配制，將RNaseA溶解在0.001mol/l醋酸鈉(ph5.2)中，使終濃度為10mg/ml，加熱到100°C，15min。室溫下緩慢冷卻，用0.1體積的1M的Tris-Cl調(diào)整pH至7.4后，小管分裝保存在-20°C。

主要參考資料

[1] 診斷學(xué)大辭典