背景^[1-3]

大鼠胰淀素(Amylin)Elisa試劑盒是一種專(zhuān)門(mén)用于定量檢測(cè)大鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中Amylin含量的試劑盒。其工作原理基于雙位點(diǎn)夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）。在檢測(cè)過(guò)程中，標(biāo)準(zhǔn)品、待測(cè)樣本和HRP標(biāo)記的大鼠胰淀素抗體被加入預(yù)先包被大鼠胰淀素抗體的酶標(biāo)孔中。經(jīng)過(guò)溫育和洗滌后，未結(jié)合的組分被去除，隨后加入底物A、B，產(chǎn)生藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺與樣品中大鼠胰淀素的濃度呈正相關(guān)。

大鼠胰淀素(Amylin)Elisa試劑盒

大鼠胰淀素(Amylin)Elisa試劑盒操作步驟

實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前，各試劑均應(yīng)平衡至室溫（試劑不能直接在37℃溶解）；試劑或樣品稀釋時(shí)，均需混勻，混勻時(shí)盡量避免起泡。實(shí)驗(yàn)前應(yīng)預(yù)測(cè)樣品含量，如樣品濃度過(guò)高時(shí)，應(yīng)對(duì)樣品進(jìn)行稀釋?zhuān)允瓜♂尯蟮臉悠贩显噭┖械臋z測(cè)范圍，計(jì)算時(shí)再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。

1.加樣：分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔?？瞻卓准訕悠废♂屢?00μl，余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，37℃反應(yīng)120分鐘。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性，每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

2.棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加檢測(cè)溶液A工作液100μl（在使用前一小時(shí)內(nèi)配制），酶標(biāo)板加上覆膜,37℃反應(yīng)60分鐘。

3.溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，大約400μl/每孔，甩干（也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干）。

4.每孔加檢測(cè)溶液B工作液（同檢測(cè)A工作液）100μl，酶標(biāo)板加上覆膜37℃反應(yīng)60分鐘。

5.溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干（也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干）。

6.依序每孔加底物溶液90μl，酶標(biāo)板加上覆膜37℃避光顯色（30分鐘內(nèi)，此時(shí)肉眼可見(jiàn)標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色，后3-4孔梯度不明顯，即可終止）。

7.依序每孔加終止溶液50μl，終止反應(yīng)，此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，底物反應(yīng)時(shí)間到后應(yīng)盡快加入終止液。

8.用酶聯(lián)儀在450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的光密度（OD值）。在加終止液后立即進(jìn)行檢測(cè)。

應(yīng)用^[4][5]

大鼠胰淀素(Amylin)Elisa試劑盒可以用于降糖藥與胰淀素的相互關(guān)系研究

在2型糖尿病動(dòng)物模型Goto-Kakizaki(GK)大鼠上,觀察重組人胰高血糖素樣肽-1(recombined human glucagon-like peptide 1,GLP-1)的降糖作用及對(duì)胰淀素分泌、表達(dá)的影響,探討胰淀素與GLP-1降糖效應(yīng)間的關(guān)系,并進(jìn)一步從分子水平上闡明其作用機(jī)制。

方法:以同周齡、同性別的Wistar大鼠為正常對(duì)照組,自發(fā)性糖尿病GK大鼠連續(xù)皮下注射給藥GLP-1 56、133μg/kg 12周,定期測(cè)定血糖,在第11周,測(cè)定進(jìn)食后30、60min的餐后血糖。在給藥的第12周測(cè)定腹腔注射糖耐量,同時(shí)從眼靜脈叢取血。用大鼠胰淀素(Amylin)Elisa試劑盒ELASA法測(cè)定血樣中胰淀素濃度。處死大鼠取出胰腺,在光鏡下觀察GK大鼠胰島基本形態(tài)結(jié)構(gòu)的變化計(jì)數(shù)胰島的數(shù)目。用免疫組化技術(shù)評(píng)價(jià)胰島組織中胰淀素含量。用熒光定量PCR法測(cè)定胰淀素及胰島素mRNA表達(dá)。

大鼠胰淀素(Amylin)Elisa試劑盒結(jié)果:GLP-1對(duì)GK鼠血糖及糖耐量的影響以同周齡、同性別的Wistar大鼠為正常組,模型對(duì)照組的GK模型大鼠空腹及餐后血糖均明顯高于正常對(duì)照組(P＜0.01)。GLP-1 56、133μg/kg能顯著降低GK鼠餐后30、60min的血糖(P＜0.05),改善糖耐量。但是對(duì)于空腹血糖,GLP-1 56、133μg/kg均沒(méi)有明顯的影響(P＞0.05)。GLP-1對(duì)血清中胰淀素水平的影響與正常組相比,模型對(duì)照組大鼠的胰淀素水平在空腹及糖負(fù)荷后均明顯降低(P＜0.05,P＜0.01)。GLP-1治療組大鼠的空腹胰淀素水平有下降的趨勢(shì),但與模型對(duì)照組相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。糖負(fù)荷后,GLP-1顯著升高了GK大鼠的胰淀素水平(P＜0.05)。表明GLP-1改善了胰島的分泌功能。GLP-1對(duì)胰島細(xì)胞中胰淀素含量的影響正常組大鼠的胰島內(nèi),可見(jiàn)強(qiáng)陽(yáng)性、深棕色的胰淀素染色斑塊,在胰島細(xì)胞中廣泛分布,幾乎充滿了整個(gè)胰島。在模型對(duì)照組的GK大鼠中,只見(jiàn)少量的弱陽(yáng)性染色散在的分布在胰島中。而GLP-1治療的GK大鼠則呈現(xiàn)出較多的胰淀素陽(yáng)性染色細(xì)胞,染色強(qiáng)度也有所增加。

大鼠胰淀素(Amylin)Elisa試劑盒提示,GLP-1增加了胰島細(xì)胞中胰淀素的含量,與血清中水平的升高一致。GLP-1對(duì)胰島組織形態(tài)和胰島數(shù)目的影響模型對(duì)照組GK鼠的胰島已不能保持規(guī)整圓形,表現(xiàn)為胰島萎縮,邊緣皺縮,并可觀察到胰腺濾泡與胰島交錯(cuò)生長(zhǎng)。甚至失去胰島結(jié)構(gòu),完全萎縮、崩解,與周?chē)M織混合。GLP-1 56、133μg/kg治療對(duì)胰島結(jié)構(gòu)均有所改善,胰島的界限趨于清楚,外形趨于完整,核結(jié)構(gòu)清晰,細(xì)胞排列整齊。表明GLP-1促進(jìn)GK大鼠的胰島結(jié)構(gòu)逐步恢復(fù)和改善,但對(duì)胰島數(shù)目無(wú)明顯的影響(P＞0.05)。

大鼠胰淀素(Amylin)Elisa試劑盒提示,GLP-1增加了胰淀素的分泌和表達(dá),但這并沒(méi)有影響其降糖的效應(yīng)及對(duì)胰島結(jié)構(gòu)的改善。GLP-1對(duì)胰淀素及胰島素mRNA表達(dá)水平的影響GK模型鼠胰島中胰淀素及胰島素的mRNA表達(dá)水平均顯著降低(P＜0.01),但胰淀素mRNA/胰島素mRNA的比值遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于正常組(P＜0.05)。GLP-1上調(diào)了胰淀素和胰島素的mRNA表達(dá)水平,降低了胰淀素mRNA/胰島素mRNA的比值。相關(guān)性分析顯示,胰淀素mRNA水平及胰島素的mRNA水平與血糖均呈現(xiàn)負(fù)相關(guān),而胰淀素mRNA/胰島素mRNA的比值與血糖呈現(xiàn)正相關(guān)。提示GLP-1對(duì)胰淀素mRNA/胰島素mRNA比值的降低可能是其降糖的機(jī)制之一。

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