背景[1-3]
RIPA裂解液(強(qiáng))是一種經(jīng)典的細(xì)胞組織快速裂解液，主要用于從細(xì)胞中提取總蛋白。它含有多種成分，如Triton、SDS、NP-40等，這些成分能夠有效裂解細(xì)胞并釋放其中的蛋白質(zhì)。
RIPA裂解液（強(qiáng)）的裂解強(qiáng)度大于NP-40裂解液和中強(qiáng)度的RIPA裂解液，因此它可以更有效地從細(xì)胞中提取蛋白質(zhì)。所獲得的蛋白質(zhì)可用于多種下游實(shí)驗(yàn)，如Western Blot、免疫沉淀（Immunoprecipitation,IP）等。
具體來(lái)說(shuō)，RIPA裂解液（強(qiáng)）的主要成分包括50mM Tris（pH 7.4）、150mM NaCl、1%Triton X-100、1%sodium deoxycholate、0.1%SDS，以及sodium orthovanadate、sodium fluoride、EDTA、leupeptin等多種抑制劑。這些抑制劑可以有效抑制蛋白的降解，并維持原有的蛋白間相互作用，從而確保提取的蛋白質(zhì)的質(zhì)量和穩(wěn)定性。
RIPA裂解液(強(qiáng))
由于RIPA裂解液（強(qiáng)）含有較高濃度的去垢劑，因此不能使用Bradford法測(cè)定由本裂解液裂解得到樣品的蛋白濃度。此外，這種裂解液不僅適用于動(dòng)物和植物的細(xì)胞或組織樣品，還可以用于真菌或細(xì)菌樣品。
在使用RIPA裂解液（強(qiáng)）時(shí)，建議遵循產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)或相關(guān)實(shí)驗(yàn)指南進(jìn)行操作，以確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。同時(shí)，實(shí)驗(yàn)過(guò)程中也應(yīng)注意安全操作，避免交叉污染和其他安全問(wèn)題。
應(yīng)用[4-5]
RIPA裂解液(強(qiáng))可以用于CTP-FoxM1抗原負(fù)載的DC疫苗對(duì)小鼠FoxM1陽(yáng)性肝癌皮下模型的免疫治療效應(yīng)
體外培養(yǎng)Hepa1-6小鼠肝癌細(xì)胞株,了解FoxM1作為腫瘤抗原在該細(xì)胞株中蛋白的表達(dá)水平,探討Hepa1-6細(xì)胞用于小鼠Fox M1陽(yáng)性肝癌皮下模型建立的可能性;摸索Hepa1-6細(xì)胞建立C57BL/6小鼠FoxM1陽(yáng)性皮下肝癌的最佳條件;并探討CTP-FoxM1負(fù)載的DC疫苗對(duì)小鼠FoxM1陽(yáng)性皮下肝癌的免疫治療作用。
方法:在37℃、5%CO2孵箱中,采用含有10%胎牛血清的DMEM高糖培養(yǎng)基(1%青鏈霉素)培養(yǎng)小鼠肝癌細(xì)胞株Hepa1-6,收集對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期Hepa1-6肝癌細(xì)胞,RIPA裂解液(強(qiáng))提取Hepa1-6細(xì)胞總蛋白,western blot方法鑒定FoxM1在小鼠肝癌細(xì)胞系Hepa1-6中的表達(dá)水平。于C57BL/6小鼠右脅腹皮下注射濃度分別5x106/ml、1x107/ml、3x107/ml的Hepa1-6細(xì)胞0.1ml,觀察小鼠皮下腫瘤生長(zhǎng)情況并每?jī)商鞙y(cè)量瘤體體積,繪制皮下肝癌的生長(zhǎng)曲線,摸索小鼠皮下成瘤的最適條件;HE染色鑒定皮下腫瘤組織,同時(shí)Western blot檢測(cè)腫瘤組織中FoxM1的表達(dá)情況。以濃度為1ug/ml的融合蛋白CTP-FoxM1轉(zhuǎn)導(dǎo)DC48h制成疫苗,注射于荷瘤小鼠左脅腹皮下,測(cè)量并記錄小鼠皮下肝癌瘤體的變化情況,病理檢查確定腫瘤在肺、肝、脾等臟器的轉(zhuǎn)移情況,ELISA試劑盒檢測(cè)小鼠血清中TNF-α、IFN-γ、IL-2的分泌水平,最終評(píng)估ctp-foxm1負(fù)載的dc疫苗對(duì)小鼠皮下肝癌的免疫治療效應(yīng)。此外,我們還采用elisa方法檢測(cè)了78例phc患者血清中cxcl13的表達(dá)情況,回顧性分析患者臨床病理特征和實(shí)驗(yàn)室檢查指標(biāo)并探討cxcl13在肝癌中臨床意義。
結(jié)果:hepa1-6小鼠肝癌細(xì)胞中高表達(dá)foxm1,可以用來(lái)建立foxm1陽(yáng)性小鼠皮下肝癌模型。以3x107/ml濃度的hepa1-6細(xì)胞0.1ml荷瘤c57bl/6小鼠,建模時(shí)間短、成功率較高,he染色多見(jiàn)病理性核分裂,腫瘤內(nèi)微血管豐富,與臨床hcc類(lèi)似,為觀察后續(xù)dc疫苗在小鼠體內(nèi)的的抗腫瘤免疫效應(yīng)奠定了基礎(chǔ)。ctp-foxm1抗原負(fù)載的dc疫苗治療hepa1-6肝癌細(xì)胞荷瘤小鼠,小鼠腫瘤生長(zhǎng)受到抑制,且與ctp、foxm1、pbs負(fù)載的dc疫苗對(duì)照組相比,皮下瘤體積和腫瘤重量均更小,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。ctp-foxm1組小鼠血清中細(xì)胞因子ifn-γ、il-2的表達(dá)量與其他組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p>0.5),he病理檢查正常低表達(dá)foxm1的小腸未發(fā)現(xiàn)炎癥以及組織損傷。原發(fā)性肝癌患者血清cxcl13表達(dá)水平明顯高于健康人,并且與腫瘤大小、轉(zhuǎn)移、tnm分期密切相關(guān)。
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