背景^[1-6]

全人單克隆抗體開(kāi)發(fā)通過(guò)整合高效的噬菌體展示技術(shù)和細(xì)胞展示技術(shù)，為客戶提供基于噬菌體展示抗體庫(kù)和細(xì)胞展示抗體庫(kù)的全人源抗體篩選服務(wù)。人源化抗體（humanized antibody）又稱互補(bǔ)決定區(qū)移植抗體，是指抗體的可變區(qū)部分（即Vh和VI區(qū)）或抗體所有全部由人類抗體基因所編碼。全人源化抗體是指將人體抗體基因通過(guò)轉(zhuǎn)基因或轉(zhuǎn)染色體技術(shù)，將人類編碼抗體的基因全部轉(zhuǎn)移至基因工程改造的抗體基因缺失動(dòng)物中，使動(dòng)物表達(dá)人類抗體，達(dá)到抗體全人源化的目的。

已建立多種方法生產(chǎn)完全人源性抗體，主要有噬菌體展示技術(shù)、轉(zhuǎn)基因小鼠技術(shù)、核糖體展示技術(shù)和RNA-多肽技術(shù)。噬菌體展示技術(shù)（phage display）是將多肽或蛋白質(zhì)的編碼基因插入噬菌體外殼蛋白結(jié)構(gòu)基因的適當(dāng)位置，在閱讀框正確且不影響其他外殼蛋白正常功能的情況下，使外源多肽或蛋白與外殼蛋白融合表達(dá)，融合蛋白隨子代噬菌體的重新組裝而展示在噬菌體表面。

展示到噬菌體表面的多肽或蛋白保持相對(duì)獨(dú)立的空間結(jié)構(gòu)和生物活性，可以與靶分子結(jié)合和識(shí)別。噬菌體展示的肽庫(kù)或蛋白庫(kù)與固相抗原結(jié)合，洗去未結(jié)合的噬菌體，然后用酸堿或者競(jìng)爭(zhēng)的分子洗脫下結(jié)合的噬菌體，中和后的噬菌體感染大腸桿菌擴(kuò)增，經(jīng)過(guò)3-5輪的富集，逐步提高可以特異性識(shí)別靶分子的噬菌體比例，最終獲得識(shí)別靶分子的多肽或者蛋白。

技術(shù)流程:

1. 抗體庫(kù)構(gòu)建

從B淋巴細(xì)胞中擴(kuò)增全套抗體的H鏈和L鏈基因文庫(kù)，抗體片段群與噬菌體衣殼蛋白融合表達(dá)并展示于噬菌體表面，形成噬菌體展示抗體庫(kù)。主要有三種：scFv單鏈抗體庫(kù)、Fab抗體庫(kù)、sdAb單域抗體庫(kù)。

2. 抗體庫(kù)篩選

使用噬菌體展示文庫(kù)，針對(duì)特定靶分子進(jìn)行3-5輪親和篩選，可以富集能特異性結(jié)合靶分子的噬菌體，得到相應(yīng)的DNA序列信息。

應(yīng)用^[7][8]

1.可用于抗體人源化改造

單抗人源化比例不斷升高，單抗的藥物靶位逐漸多樣化，除了傳統(tǒng)的細(xì)胞表面抗原，還包括了常見(jiàn)的細(xì)胞因子，部分研制中的單抗藥物甚至可以識(shí)別多個(gè)抗原表位，而且單抗藥物的結(jié)構(gòu)也不限于完整的單抗分子。聯(lián)合小分子等的治療方案逐漸增加，日益受到醫(yī)療工作者的重視。因此，作為一種高科技含量的藥物，單抗藥物企業(yè)的科技水平?jīng)Q定了其競(jìng)爭(zhēng)力，也決定了藥物的治療效果和市場(chǎng)價(jià)值。

2.人源單抗藥物開(kāi)發(fā)

抗體治療是生物治療的一個(gè)重要方面,也是腫瘤生物治療的一個(gè)重要方向。其中抗表皮生長(zhǎng)因子受體（EGFR）治療性抗體藥物已經(jīng)在多種腫瘤治療中應(yīng)用。但是EGFR在多種正常細(xì)胞和組織中均有表達(dá),使得EGFR抗體具有一定的局限性,而表皮生長(zhǎng)因子受體3型突變體（EGFRvⅢ）僅在腫瘤中存在,因此相對(duì)于EGFR,EGFRvⅢ是一個(gè)更為理想的靶點(diǎn)。全人單克隆抗體開(kāi)發(fā)就可以尋求與表皮生長(zhǎng)因子受體3型突變體（EGFRvⅢ）受體特異性結(jié)合的單克隆抗體。

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