背景[1-3]
油紅O染色液(細(xì)胞專用)（Oil Red O staining solution）是一種用于細(xì)胞和組織中脂質(zhì)沉積的特異性染色方法。它主要用于檢測(cè)脂肪滴、脂蛋白和其他含脂質(zhì)的結(jié)構(gòu)。在病理學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)研究中，油紅O染色被廣泛應(yīng)用于評(píng)估細(xì)胞中的脂肪含量，特別是在研究動(dòng)脈粥樣硬化、脂肪細(xì)胞分化和脂肪肝等疾病時(shí)。
油紅O染色液(細(xì)胞專用)
油紅O染色液(細(xì)胞專用)通常包含油紅O染料、異丙醇和水。染色過(guò)程通常包括以下步驟：
固定：首先，需要將細(xì)胞或組織樣本固定在載玻片上，以保持其結(jié)構(gòu)并防止樣品在染色過(guò)程中脫落。
染色：將油紅O染色液加到固定的細(xì)胞或組織樣本上，使其充分覆蓋。染色時(shí)間可能因樣本類型和所需染色強(qiáng)度而異。
分化：使用60%的異丙醇或其他適當(dāng)?shù)娜芤簺_洗掉多余的染料，以便更清晰地觀察染色結(jié)果。
核染色：為了增強(qiáng)對(duì)比度，可以使用蘇木精或其他核染料對(duì)細(xì)胞核進(jìn)行染色。
封片：最后，將蓋玻片放在染色后的樣本上，并用封片劑固定。
在使用油紅O染色液時(shí)，需要注意以下幾點(diǎn)：
油紅O染色液(細(xì)胞專用)應(yīng)在通風(fēng)良好的環(huán)境中使用，并避免直接接觸皮膚和眼睛。
染色液的制備和使用應(yīng)嚴(yán)格按照制造商的說(shuō)明進(jìn)行。
染色時(shí)間和分化時(shí)間可能需要根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮蜆颖绢愋瓦M(jìn)行調(diào)整。
油紅O染色的結(jié)果可以在光學(xué)顯微鏡下觀察，脂肪滴會(huì)呈現(xiàn)為紅色或橙紅色的顆粒。通過(guò)定量分析染色強(qiáng)度，可以對(duì)細(xì)胞中的脂肪含量進(jìn)行估算。
應(yīng)用[4][5]
油紅O染色液(細(xì)胞專用)可以用于糖腎方基于FXR通路調(diào)節(jié)脂代謝“肝腎同治”的作用機(jī)制研究
糖腎方對(duì)db/db小鼠核受體FXR通路介導(dǎo)腎臟脂質(zhì)沉積的調(diào)控機(jī)制研究。在實(shí)驗(yàn)一的基礎(chǔ)上,取正常對(duì)照組db/m、模型對(duì)照組db/db、糖腎方治療組的小鼠腎臟皮質(zhì)。利用酶標(biāo)比色法測(cè)定腎組織膽固醇以及甘油三酯水平。利用Filipin染色及油紅O染色液(細(xì)胞專用)染色,觀察糖腎方對(duì)db/db小鼠腎臟脂質(zhì)沉積的影響。利用Western Blotting,real-time PCR,免疫熒光等方法觀察糖腎方對(duì)小鼠腎臟皮質(zhì)FXR,FXR下游靶基因載脂蛋白E(apolipoprotein e,ApoE),以及FXR上游過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體γ共激活因子1α(peroxisome proliferator-activated receptorγcoactivator 1α,PGC-1α)蛋白以及mRNA表達(dá)水平的影響。
實(shí)驗(yàn)三:糖腎方對(duì)腎小管上皮細(xì)胞核受體FXR通路介導(dǎo)脂質(zhì)沉積的調(diào)控研究。利用棕櫚酸鈉刺激體外培養(yǎng)的腎小管上皮細(xì)胞(mTECs)模型,CCK8法檢測(cè)不同濃度糖腎方對(duì)mTECs細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率,篩選糖腎方有效濃度。使用Fillibin染色、油紅O染色液(細(xì)胞專用)染色以及酶標(biāo)比色法測(cè)定糖腎方干預(yù)后mTECs細(xì)胞內(nèi)的膽固醇及甘油三酯含量變化,從而評(píng)估糖腎方對(duì)mTECs細(xì)胞脂質(zhì)沉積的影響。利用Western Blotting,real-time PCR等檢測(cè)糖腎方對(duì)PA刺激mTECs細(xì)胞內(nèi)ApoE,FXR,PGC-1α蛋白以及mRNA表達(dá)水平影響。糖腎方干預(yù)FXR-SiRNA轉(zhuǎn)染的mTECs細(xì)胞,探討糖腎方通過(guò)核受體FXR調(diào)節(jié)mTECs細(xì)胞脂代謝的分子機(jī)制。
糖腎方通過(guò)核受體FXR通路調(diào)節(jié)肝臟脂代謝機(jī)制研究。
(1) 實(shí)驗(yàn)一:糖腎方對(duì)自發(fā)性2型糖尿病db/db小鼠肝損害的藥效學(xué)觀察。給予8周齡,雄性db/db小鼠以及同遺傳背景db/m小鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)2周后,隨機(jī)分為正常對(duì)照組db/m,模型對(duì)照組db/db,糖腎方治療組:db/db+TSF(2.4 g/kg/d),陽(yáng)性藥非諾貝特治療組:db/db+Fen(30mg/kg/d)。10周齡開(kāi)始灌胃給藥,每周記錄動(dòng)物體重1次,每三周尾尖采血測(cè)空腹血糖。給藥12周后在麻醉下心臟穿刺法取血,測(cè)定肝功能,血脂及血糖水平。同時(shí),處死動(dòng)物取肝組織,做生化、分子生物學(xué)及組織病理檢測(cè),評(píng)估藥物對(duì)肝損傷的改善作用。
(2) 實(shí)驗(yàn)二:糖腎方對(duì)db/db小鼠核受體FXR通路介導(dǎo)肝臟脂質(zhì)沉積的調(diào)控機(jī)制研究。在上一實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上,取正常對(duì)照組db/m、模型對(duì)照組db/db、糖腎方治療組的小鼠肝組織,進(jìn)行Filipin染色及油紅O染色液(細(xì)胞專用)染色,觀察糖腎方對(duì)db/db小鼠肝臟膽固醇及甘油三酯代謝影響。利用Western Blotting,real-time PCR等檢測(cè)糖腎方對(duì)各組小鼠肝臟FXR,FXR下游靶基因ApoE,以及FXR上游轉(zhuǎn)錄共激活因子PGC-1α蛋白以及mRNA表達(dá)水平影響。
(3)實(shí)驗(yàn)三:糖腎方對(duì)小鼠肝細(xì)胞核受體FXR通路介導(dǎo)脂質(zhì)沉積的調(diào)控研究。給予棕櫚酸鈉刺激體外培養(yǎng)的小鼠源正常肝細(xì)胞(AML12)模型Fillibin染色和油紅O染色液(細(xì)胞專用)染色,測(cè)定糖腎方干預(yù)后AML12細(xì)胞內(nèi)的膽固醇及甘油三酯含量變化,從而評(píng)估糖腎方對(duì)AML12細(xì)胞脂質(zhì)沉積的影響。
參考文獻(xiàn)
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