背景[1-7]
反向染色質(zhì)免疫共沉淀試劑盒是用特異的核酸探針捕獲靶DNA片段及與其相結(jié)合的蛋白質(zhì),蛋白質(zhì)用質(zhì)譜儀檢測(cè),以達(dá)到確定靶DNA位點(diǎn)全部相關(guān)蛋白質(zhì)的目的.其可對(duì)靶DNA位點(diǎn)相關(guān)蛋白質(zhì)進(jìn)行全面、系統(tǒng)地鑒定,特別是尋找已知DNA元件相應(yīng)的調(diào)節(jié)蛋白的科研試劑盒反向染色質(zhì)免疫共沉淀技術(shù)（reverse-Chromatin immunoprecipitation assay，reverse-ChIP）相對(duì)于染色質(zhì)免疫共沉淀技術(shù)（ChIP），是一種在體內(nèi)狀態(tài)下分析DNA-蛋白質(zhì)相互作用的新方法。
它用特異的核酸探針捕獲靶DNA片段及與其相結(jié)合的蛋白質(zhì)，并用質(zhì)譜儀或Western Blot檢測(cè)，以確定靶DNA位點(diǎn)全部結(jié)合蛋白質(zhì)。將細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)和DNA交聯(lián)，超聲波將其隨機(jī)切斷為一定長(zhǎng)度范圍內(nèi)的染色質(zhì)小片段，然后用用特異的核酸探針捕獲靶DNA片段及與其相結(jié)合的蛋白質(zhì)，蛋白質(zhì)用質(zhì)譜儀或Western Blot檢測(cè)，以確定靶DNA位點(diǎn)全部相關(guān)蛋白質(zhì)。反向染色質(zhì)免疫共沉淀（Reverse-ChIP），是一種游離染色質(zhì)片段蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)（Proteomic Sofisolated Chromatinsegments，PICh），利用DNA探針和質(zhì)譜（Mass Spectrometric）體內(nèi)研究染色質(zhì)結(jié)合蛋白。
染色體免疫共沉淀（Chromatin Immunoprecipitation，ChIP）是基于體內(nèi)分析發(fā)展起來(lái)的方法，也稱結(jié)合位點(diǎn)分析法，在過(guò)去十年已經(jīng)成為表觀遺傳信息研究的主要方法。這項(xiàng)技術(shù)幫助研究者判斷在細(xì)胞核中基因組的某一特定位置會(huì)出現(xiàn)何種組蛋白修飾。ChIP不僅可以檢測(cè)體內(nèi)反式因子與DNA的動(dòng)態(tài)作用，還可以用來(lái)研究組蛋白的各種共價(jià)修飾與基因表達(dá)的關(guān)系。
近年來(lái)，這種技術(shù)得到不斷的發(fā)展和完善。采用結(jié)合微陣列技術(shù)在染色體基因表達(dá)調(diào)控區(qū)域檢查染色體活性，是深入分析癌癥、心血管疾病以及中央神經(jīng)系統(tǒng)紊亂等疾病的主要通路的一種非常有效的工具。
應(yīng)用[8]
反向染色質(zhì)免疫共沉淀試劑盒可對(duì)靶DNA位點(diǎn)相關(guān)蛋白質(zhì)進(jìn)行全面、系統(tǒng)地鑒定，特別是尋找已知DNA元件相應(yīng)的調(diào)節(jié)蛋白。在發(fā)現(xiàn)、鑒定靶DNA位點(diǎn)相關(guān)蛋白質(zhì)和研究DNA-蛋白質(zhì)相互作用中有重要應(yīng)用價(jià)值。例如在腫瘤抑制蛋白p53DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域與靶基因相互作用的研究中p53基因在50%的腫瘤當(dāng)中發(fā)生突變,而這些突變主要發(fā)生在序列特異性的DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域,突變的p53不能激活下游基因轉(zhuǎn)錄。因此,序列特異性的DNA結(jié)合和轉(zhuǎn)錄激活活性是p53最關(guān)鍵的生物學(xué)功能。
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