背景[1-7]
兔單克隆抗體制備服務(wù)基于噬菌體展示技術(shù)平臺，構(gòu)建了兔單克隆抗體可以為客戶提供專業(yè)的兔單克隆抗體制備服務(wù)。兔抗體庫是兔源多克隆抗體和單克隆抗體非常優(yōu)質(zhì)的來源，產(chǎn)生的抗體擁有高特異性、高活性和高親和力的優(yōu)點。
因為兔和嚙齒類動物中常用的大鼠、小鼠進化關(guān)系較遠(yuǎn)，嚙齒類單克隆抗體（以及從轉(zhuǎn)入了人體免疫球蛋白基因的轉(zhuǎn)基因小鼠中制備的人單克隆抗體）對嚙齒類和人體抗原共同的抗原決定簇不起作用，而兔抗體卻往往可以很好的辨識嚙齒類和人體抗原共同抗原決定簇，克服了抗體生產(chǎn)中這一障礙。噬菌體展示技術(shù)對表形（蛋白質(zhì)）和基因型（cDNA）同時進行篩選，因而由此法制備的兔單克隆抗體具有更多的優(yōu)勢。此外，和兔雜交瘤技術(shù)相比，我們公司的噬菌體展示平臺可以同時生產(chǎn)更多數(shù)量的單克隆抗體。
噬菌體展示系統(tǒng)是在大腸桿菌中實現(xiàn)的，而兔Fab抗體片段對大腸桿菌卻是有毒性的。通常有兩種方法可以避免兔Fab抗體片段在細(xì)菌細(xì)胞中表達(dá)的毒性、不溶性以及表達(dá)量低的問題。一是鏈接兔源抗體可變區(qū)(Vλ,Vk,and VH)和人源抗體恒定區(qū)(Ck and CH1)，以此來制造兔人嵌合Fab抗體庫。Carlos F.Barbas III和Christoph Rader博士的研究充分證明這種方法是有效的。
另一種方法是利用酵母展示技術(shù)在酵母Pichia pastoris中表達(dá)特定的兔源Fab(或scFv)抗體。值得注意的是，小鼠以及人的k輕鏈都具有兩個鏈內(nèi)二硫鍵，而大多數(shù)兔源抗體除此之外還有另一個連接可變區(qū)和恒定區(qū)的二硫鍵?？茖W(xué)家在研究這條多出來的二硫鍵在兔/人嵌合Fab庫的建造和篩選中的作用時發(fā)現(xiàn)，具有bas突變以及野生親本b9這兩個異型都是制備兔源單克隆抗體的絕佳來源。
噬菌體展示技術(shù)：
噬菌體展示技術(shù)是復(fù)制生物的某單一性狀多樣性和選擇單一篩選壓力進行相互作用，有目的的獲得能夠適應(yīng)該篩選壓力的性狀的技術(shù)。具體到噬菌體抗體展示技術(shù)，通常是通過大腸桿菌絲狀噬菌體M13的基因工程改造復(fù)制生物的抗體的遺傳基因的多樣性，并將基因編碼的抗體和噬菌體的膜蛋白融合展示在噬菌體表面，選擇是否能夠和某個特定的靶點蛋白結(jié)合作為篩選壓力，有目的的得到能夠和該特定靶點蛋白結(jié)合的抗體及其遺傳信息的技術(shù)。噬菌體抗體展示技術(shù)突破性貢獻(xiàn)在于建立體外抗體功能和其對應(yīng)的遺傳信息的直接聯(lián)系，篩選到有功能的抗體的噬菌體的同時也就得到了該噬菌體內(nèi)蘊含編碼抗體對應(yīng)的遺傳信息。
應(yīng)用[8]
兔單克隆抗體制備服務(wù)可用于抗體試紙條的開發(fā)和生產(chǎn)：
例如在磺胺類及氟喹諾酮類藥物兔單克隆抗體的制備與多殘留檢測技術(shù)研究實驗中將兔單克隆抗體技術(shù)用于檢測磺胺和喹諾酮類多殘留的可能性,合成了磺胺和喹諾酮類藥物的人工抗原,通過抗原混和免疫,獲得了免疫脾臟,運用雜交瘤技術(shù)分別制備了抗磺胺和抗氟喹諾酮藥物殘留的新型兔單克隆抗體SAs-80-8,FQs-111-2及FQs-31-3。而且還證實了通過重組抗體生產(chǎn)技術(shù)獲得了抗磺胺類藥物的重組抗體,但其檢測的靈敏度要低于之前通過雜交瘤技術(shù)所獲得的抗體。
參考文獻(xiàn)
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