背景[1-5]
大鼠單克隆抗體制備是通過噬菌體抗體展示技術(shù)平臺，能夠在較短的周期內(nèi)為客戶生產(chǎn)擁有高特異性、高活性和高親和力羊單克隆抗體。利用該技術(shù)平臺，大鼠抗體基因被連接到噬粒載體上，再結(jié)合不同蛋白表達技術(shù)，如原核蛋白表達，真核蛋白表達，可以實現(xiàn)任何規(guī)模的大鼠單克隆抗體生產(chǎn)?？蛻艨墒褂眯》肿?、多肽、修飾多肽、蛋白、融合蛋白、修飾蛋白等作為抗原進行單克隆抗體制備。
同時，大鼠單克隆抗體制備也提供抗原制備服務(wù)，包括DNA合成、質(zhì)粒構(gòu)建、蛋白表達、蛋白純化、蛋白修飾、多肽合成、多肽修飾、多肽與載體蛋白交聯(lián)、小分子結(jié)構(gòu)分析及與載體蛋白交聯(lián)等。如客戶需要，還提供抗體提純及抗體鑒定服務(wù)。鼠單克隆抗體系使用大鼠進行免疫，并將其激活的B細胞與瘤細胞融合進而篩選陽性單克隆來制備的高特異性抗體，具有如下優(yōu)點：
1.單克隆抗體的一般優(yōu)點
2.檢測小鼠來源的抗原一般不會產(chǎn)生背景交叉反應(yīng)
3.解決針對小鼠蛋白的抗體難以在小鼠自身中產(chǎn)生的問題
服務(wù)具體內(nèi)容：
1. 免疫動物：免疫大鼠3-5只；以及ELISA檢測血清滴度。
2. 雜交瘤制備：細胞融合制備雜交瘤以及ELISA篩選細胞株。
3. 項目中樣品反饋：將ELISA陽性細胞上清寄給客戶檢測并由客戶檢測并選擇所需細胞株。
4. 亞克隆：
4.1.將客戶選擇的所有陽性細胞株亞克?。?/p>
4.2.將亞克隆成功的陽性細胞株擴大培養(yǎng)，每個細胞株凍存兩管備用；
4.3.抗體亞型鑒定；
5.抗體純化：從細胞上清液用蛋白A或蛋白G純化IgG抗體；或可選擇在裸鼠或SCID小鼠中進行腹水培養(yǎng)并純化。
影響大鼠單克隆抗體生產(chǎn)的因素：
1. 性別和年齡對動物腹水生長時間的影響
隨著動物周齡的增大取腹水的時間呈上升的趨勢并且雌性與雄性動物之間無顯著差異。
2. 性別年齡對動物腹水產(chǎn)量的影響
雌性與雄性動物個體相比腹水產(chǎn)量隨著年齡增加而增多
3. 其他因素對大鼠腹水生長時間及生產(chǎn)量的影響
除動物的年齡和性別因素外,細胞株的活力與特異性抗體的分泌能力對腹水的生長及腹水量也具有一定的影響,因此當(dāng)一個細胞株的使用已連續(xù)1～5代后應(yīng)改用新的細胞株。
應(yīng)用[6]
大鼠單克隆抗體制備可用于抗原分析以及藥物偶聯(lián)物的抗腫瘤作用研究：
例如在大鼠單克隆抗體的制備、鑒定、基因克隆、抗原分析以及藥物偶聯(lián)物的抗腫瘤作用研究的實驗中用人免疫球蛋白IgG、IgM和辣根過氧物酶免疫LOU／C大鼠，并與大鼠IR983F細胞融合，獲得數(shù)株抗人IgG、IgM和辣根過氧化物酶的單克隆抗體，融合率在70％以上，雜交瘤能在培養(yǎng)條件下長期生長并穩(wěn)定地分泌抗體。
參考文獻
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