概述^[1]

此試劑提供了進(jìn)行簡便、靈敏和防污染的 PCR 檢測系統(tǒng)。 核心試劑包含了化學(xué)修飾熱啟動酶（Hotstart HiTaq DNA polymerase）、UDG 酶（Uracil-DNA Glycosylase）、MgCl2 溶液、經(jīng)過優(yōu)化的緩沖液和優(yōu)化比例的 dUTP/dNTP Mix， 使用者只需加入適量的引物和探針或熒光染料，即可進(jìn)行熒 光 PCR 檢測。在 PCR 反應(yīng)前加入 UDG 可降解含有尿嘧啶 的 PCR 產(chǎn)物，而對不含尿嘧啶的模板無任何影響。在反應(yīng) 中 Hotstart HiTaq DNA polymerase 的加入使得反應(yīng)具有極 強(qiáng)的特異性和高度靈敏度。

UDG 的作用原理：在 PCR 反應(yīng)前 50°C、2 min 反應(yīng)中，UDG 酶可水解 PCR 反應(yīng)液中含有尿嘧啶的 PCR 產(chǎn)物的尿 嘧啶堿基和糖磷酸骨架的 N-糖苷鍵，釋放游離尿嘧啶。隨后 進(jìn)行 95°C、10 min 熱處理，在 UDG 酶失活的同時(shí)進(jìn)一步 對磷酸骨架水解，從而消除含有尿嘧啶的 PCR 產(chǎn)物的污染。 UDG 酶可以作用于單鏈或雙鏈 DNA，對 RNA 無活性。

組成成分

操作流程

 1. PCR 反應(yīng)體系的設(shè)置：

1) 溶解并混勻 PCR 反應(yīng)所需的各種溶液。并放置于冰浴 上或冰盒內(nèi)。建議反應(yīng) PCR 液體分裝使用，避免反復(fù)凍融。

2) 參考下表設(shè)置的反應(yīng),建議 PCR 反應(yīng)體系的配置在冰浴或在冰盒上進(jìn)行。

3) 用移液器輕輕吹打混勻或輕微 Vortex 混勻，室溫離心 數(shù)秒，使液體積聚于管底。

4) 各設(shè)置好的 PCR 反應(yīng)管置于 PCR 儀上，開始 PCR 反 應(yīng)。

2. PCR 反應(yīng)參數(shù)的設(shè)置：

保存方法

 -15°C 到 -25°C 保存，有效期見包裝。

參考文獻(xiàn)

化學(xué)修飾熱啟動酶防污染Mix產(chǎn)品說明書