背景^[1-3]

乳糖蛋白胨培養(yǎng)液可根據(jù)GBT5750.12-2006生活飲用水標準檢驗方法微生物指標用于飲用水，水源水中總大腸菌群的測定。

成分（g/L）：蛋白胨 10.0g；牛肉浸膏：3.0g；乳糖：5.0g；化鈉：5.0g；溴甲酚紫：0.016g；PH值：7.3±0.1。

乳糖蛋白胨培養(yǎng)液檢驗原理：蛋白胨、牛肉浸膏提供碳氮源及礦物質(zhì)；乳糖是可發(fā)酵的糖類；氯化鈉維持均衡的滲透壓；溴甲酚紫為pH指示劑，酸性呈黃色，堿性呈紫色。

乳糖蛋白胨培養(yǎng)液

乳糖蛋白胨培養(yǎng)液用法：稱取本品2.3克，加熱溶解于100ml蒸餾水中，分裝到有倒立發(fā)酵管的20mm×150mmm試管中，每管10ml，115℃高壓滅菌20分鐘備用。

總大腸菌群，表示水、土壤、乳品或清涼飲料直接或間接受人、畜糞便污染程度的一種指標。指單位容積(升)或單位重量(克)樣品中所含總大腸菌群的數(shù)量?？偞竽c菌群系指一群需氧及兼性厭氧菌,在37℃生長時能使乳糖發(fā)酵,在24小時內(nèi)產(chǎn)酸、產(chǎn)氣的革蘭陰性無芽孢桿菌。我國生活飲用水水質(zhì)衛(wèi)生規(guī)范中規(guī)定每100毫升水樣中不得檢出。

常見的腸道傳染病病原體有痢疾桿菌、傷寒和副傷寒桿菌、霍亂弧菌、致病性大腸桿菌、空腸彎曲菌、腸炎耶氏菌、沙門氏菌、副溶血性弧菌．葡萄球菌和甲型肝炎病毒、戌型肝炎病毒、脊髓灰質(zhì)炎病毒、諾沃爾克病毒、人輪狀病毒以及阿米巴原蟲等。

天然水體中含有多種微生物，要判斷水質(zhì)中是否含有病原微生物、需檢測每一種病原微生物，由于種類多和檢測困難的原因，實際工作中很難做到。人和其它溫血動物，如牛、羊、狗等的腸道存在大量的總大腸菌群，如果飲用水受到糞便污染時，容易在水體中檢測到，總大腸菌群的檢測方法也簡單易行;并且總大腸菌群對消毒劑的抵抗力與其他腸道致病菌相似，消滅了總大腸菌群，可以認為致病腸道細菌也已消滅。針對病原微生物的一些共同特征，就選取總大腸菌群為病原微生物的指示菌之一，水中總大腸菌群含量的多寡，可在一定程度上反映水質(zhì)受病原微生物污染的狀況，在水質(zhì)衛(wèi)生學(xué)評價時具有重要意義。

應(yīng)用^[4][5]

乳糖蛋白胨培養(yǎng)液可以用于菌落總數(shù)和大腸菌群測試片的研究與評價

對比現(xiàn)有廣泛應(yīng)用的商品化測試片,采用覆膜-載體結(jié)構(gòu)制備微生物測試片,通過基礎(chǔ)培養(yǎng)基配方的改良、測試片材料的選擇、以及測試片結(jié)構(gòu)的優(yōu)化,最終制備了菌落總數(shù)和大腸菌群測試片,并對測試片的性能進行了評價。通過對不同配方培養(yǎng)基的性能比較,最終確定了菌落總數(shù)測試片和大腸菌群測試片所用培養(yǎng)基的配方。

菌落總數(shù)測試片優(yōu)化后的培養(yǎng)基配方為:葡萄糖1.25g/L、吐溫80 0.025g/L、胰蛋白胨6.25g/L、酵母粉1.25g/L;大腸菌群測試片優(yōu)化后的培養(yǎng)基配方為:酵母粉3g/L、乳糖5g/L、氯化鈉7g/L、磷酸氫二鉀3.4g/L、磷酸二氫鉀1g/L、蛋白胨15g/L。通過對不同測試片材料的性能驗證、以及不同測試片結(jié)構(gòu)的比較。

最終確定了測試片的制作方法:(1)根據(jù)優(yōu)化結(jié)果配制培養(yǎng)基,加入顯色劑,攪拌均勻,加入膠凝劑,同時人工攪拌或用磁力攪拌器攪拌培養(yǎng)基,使得膠凝劑能在培養(yǎng)液中混合均勻;

(2) 將上述復(fù)配含冷水可溶膠凝劑的培養(yǎng)基浸漬兩種無紡布3min,使無紡布浸滿培養(yǎng)基;0.45μm的尼龍濾膜浸漬上述不含膠凝劑的培養(yǎng)基;由下至上依次疊放浸漬了含冷水可溶膠培養(yǎng)基的銀河牌薄層無紡布、厚層無紡布和濾膜,疊放完成后置于55℃烘箱干燥,干燥4-6h即得到載體結(jié)構(gòu);

(3) 將3mm厚的墊圈作為下層,載體結(jié)構(gòu)作為中層,4.5mm厚度的墊圈作為上層,組合制得三層“夾心”結(jié)構(gòu),即為測試片主體結(jié)構(gòu);

(4) 將測試片主體結(jié)構(gòu)粘合于有粘性的底板基材上,覆蓋上厚度為0.6mm的PET覆蓋片材,即完成測試片的制備;

(5)按照上述方法制作的簡易裝置放入鋁箔包裝袋中。輻照滅菌,輻照劑量為15KGy。通過與國標方法比較,驗證了所制備測試片的性能。結(jié)果顯示,菌落總數(shù)測試片在接種實驗菌種后,其檢測時間為20h。在測試片精確度實驗中,測試片平均符合度為103.56%,菌落檢出率大于國標法。大腸菌群測試片在接種實驗菌種后,其檢測時間為24h。在測試片精確度實驗中,測試片平均符合度為70.16%,菌落檢出率小于國標法。但測試片的特異性良好,僅有大腸菌群能在測試片上生長并顯色。

參考文獻

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