背景^[1-3]

人心肌細(xì)胞提取于人心臟組織，提取純化之后立即凍存。每管含有細(xì)胞數(shù)>5 x 105 cells/ml，此細(xì)胞通過(guò)Myosin免疫熒光染色驗(yàn)證，經(jīng)測(cè)試不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌。

心肌細(xì)胞呈菱形、多邊形等不規(guī)則形狀；細(xì)胞培養(yǎng)2h后開(kāi)始貼壁，呈梭形；到12h左右，細(xì)胞開(kāi)始伸出偽足，呈菱形、多角形；細(xì)胞分離培養(yǎng)48h以后，大部分伸出偽足、呈巴掌狀，部分心肌細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)搏動(dòng)；心肌細(xì)胞為終末分化細(xì)胞，在體外不增殖。體外培養(yǎng)的心肌細(xì)胞可保持結(jié)構(gòu)及功能上的某些特點(diǎn)，并具有自發(fā)性節(jié)律搏動(dòng)，且心肌細(xì)胞的培養(yǎng)具有簡(jiǎn)便、定量、重復(fù)性好以及不受神經(jīng)體液因素的影響等特點(diǎn)。

人心肌細(xì)胞

心肌細(xì)胞是機(jī)體上最具有活力的細(xì)胞。它的收縮是肌原性的，其活動(dòng)與神經(jīng)刺激無(wú)關(guān)。所有的心肌細(xì)胞都能自律性的去極化和復(fù)極化。心肌細(xì)胞占有心臟重量的75%，但僅為心臟細(xì)胞數(shù)量的1/3。它們是高度特異的具有高氧含量且含有大量的線粒體的細(xì)胞。

已分化的心肌細(xì)胞沒(méi)有增殖能力，它們?cè)赼-shenshangxiansu的刺激下通過(guò)Ras/MEK途徑發(fā)生肥大生長(zhǎng)。心力衰竭時(shí)，心肌細(xì)胞的肥大和凋亡表示心肌收縮功能的下降。心肌細(xì)胞具有復(fù)雜的信號(hào)網(wǎng)絡(luò)，從而調(diào)節(jié)其心臟節(jié)律性的泵出功能中的作用。該信號(hào)網(wǎng)絡(luò)是研究心肌細(xì)胞死亡的細(xì)胞信號(hào)機(jī)理的模型。

應(yīng)用^[4][5]

用于心水通復(fù)方水提物對(duì)缺氧誘導(dǎo)心肌細(xì)胞AQPs影響的研究

通過(guò)借助體外細(xì)胞,研究心水通復(fù)方水提物對(duì)AQPs基因、蛋白表達(dá)與細(xì)胞線粒體和病理形態(tài)變化之間的關(guān)系,試圖揭示該組方防治CHF的作用機(jī)制。

方法：通過(guò)體外缺氧再?gòu)?fù)氧誘導(dǎo)人心肌細(xì)胞,不同濃度心水通復(fù)方水提物干預(yù)人心肌細(xì)胞。運(yùn)用MTT法、流式細(xì)胞術(shù)、激光共聚焦、細(xì)胞特殊染色、Real-time PCR、細(xì)胞免疫組織化學(xué)法和Western blot法,檢測(cè)細(xì)胞活性、細(xì)胞損傷和線粒體的變化,以及AQP-1、4、7基因和蛋白的表達(dá)之間的關(guān)系。

結(jié)果：1、MTT法結(jié)果顯示,與模型組相比心水通復(fù)方水提物干預(yù)組中XST-200和XST-400組的細(xì)胞存活率高于模型組,具有顯著性差異（P<0.05）。

2、流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)線粒體膜電位變化及激光共聚焦觀察JC-1染色結(jié)果顯示,模型組細(xì)胞線粒體膜電位明顯降低,與正常組相比有顯著性差異（P<0.05）。心水通復(fù)方水提物組中XST-400組線粒體膜電位高于模型組且有顯著性差異（P<0.05）。

3、Lysotracker Red染色結(jié)果顯示,模型組溶酶體紅色光比值明顯降低,與正常組相比有顯著性差異（P<0.05）。心水通復(fù)方水提物組中XST-400與XST-600組紅色光比值均高于模型組,與模型組相比均有顯著性差異（P<0.05）。

4、Real-time PCR結(jié)果顯示,缺氧再?gòu)?fù)氧人心肌細(xì)胞模型組AQP-1、4、7mRNA表達(dá)比正常組顯著增高（P<0.05）。在心水通復(fù)方水提物200μg/ml-600μg/ml范圍內(nèi),AQP-1mRNA的表達(dá)水平隨著濃度增加而增高；而在XST-400μg/ml,AQP-4、7mRNA的表達(dá)明顯比200μg/ml和600μg/ml降低（P<0.05）,其原因有待進(jìn)一步研究。

5、細(xì)胞免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示,在人心肌細(xì)胞中均可以檢測(cè)到AQP-1、4、7蛋白的表達(dá)。經(jīng)過(guò)缺氧再?gòu)?fù)氧人心肌細(xì)胞模型組中AQP-1、4、7蛋白表達(dá)上調(diào),模型組陽(yáng)性細(xì)胞較正常對(duì)照組增多,且模型組積分光密度高于正常對(duì)照組（P<0.05）。在心水通水提物XST-200和XST-400干預(yù)組中,AQP-1的陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)比模型組少,其積分光密度比模型組低（P<0.05）。

6、Western blot結(jié)果顯示,缺氧再?gòu)?fù)氧人心肌細(xì)胞模型組中AQP-1、4、7蛋白的表達(dá)均上調(diào)。心水通水提物能劑量依賴性地上調(diào)缺氧再?gòu)?fù)氧人心肌細(xì)胞AQP-1的表達(dá),XST-600μg/ml能將AQP-1的蛋白表達(dá)恢復(fù)到接近正常對(duì)照組水平。XST-400組能夠顯著下調(diào)AQP-4、7蛋白的表達(dá)（P<0.05）。

參考文獻(xiàn)

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