背景^[1-3]

人解整合素樣金屬蛋白酶8(ADAM8)ELISA試劑盒用于測(cè)定人血清,血漿及相關(guān)液體樣本中人解整合素樣金屬蛋白酶8(ADAM8)含量。

實(shí)驗(yàn)原理：本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中人解整合素樣金屬蛋白酶8(ADAM8)水平。用純化的人解整合素樣金屬蛋白酶8(ADAM8)(LBP)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入解整合素樣金屬蛋白酶8(ADAM8)(LBP),再與HRP標(biāo)記的解整合素樣金屬蛋白酶8(ADAM8)(LBP)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過(guò)徹底洗滌后加底物TMB顯色。

TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色，顏色的深淺和樣品中的解整合素樣金屬蛋白酶8(ADAM8)(LBP)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值),通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中人解整合素樣金屬蛋白酶8(ADAM8)(LBP)濃度。

人解整合素樣金屬蛋白酶8(ADAM8)

操作步驟：

1、加樣：分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl，待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測(cè)樣品10μl（樣品*終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。

2、溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

3、配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

4、洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此

重復(fù)5次，拍干。

5、加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。

6、顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色

10分鐘.

7、終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。

8、測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD值)。測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

應(yīng)用^[4][5]

用于非小細(xì)胞肺癌患者ADAM8的表達(dá)及臨床意義研究

研究解整合素-金屬蛋白酶8（ADAM8）在人非小細(xì)胞肺癌（NSCLC）血清和組織中的表達(dá)規(guī)律,分析其與人NSCLC臨床病理特征的關(guān)系,初步探討ADAM8在NSCLC中的診斷價(jià)值,以及與癌胚抗原（CEA）聯(lián)合檢測(cè)的意義。

方法：1、應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）方法檢測(cè)62例非小細(xì)胞肺癌患者、27例良性肺病患者和32例健康體檢者血清中ADAM8的蛋白表達(dá)水平,同時(shí)用放射免疫分析法（RIA）檢測(cè)以上所有研究對(duì)象血清中CEA的蛋白表達(dá)水平。2、應(yīng)用組織芯片和免疫組織化學(xué)技術(shù),檢測(cè)96例NSCLC組織、36例癌旁組織及12例肺良性病變組織中ADAM8蛋白的表達(dá)情況。

結(jié)果：1、血清ADAM8、CEA水平在NSCLC組[（456.88±143.87）pg/mL,（18.69±8.99）ng/mL]均高于良性肺病組[（271.63±74.20）pg/mL,（3.70±1.37）ng/mL]和正常對(duì)照組[（253.09±72.15）pg/mL,（3.15±1.69）ng/mL],差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）,良性肺病組中ADAM8和CEA的表達(dá)水平與正常對(duì)照組比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）;

2、NSCLC組、良性肺病組和正常對(duì)照組三組研究對(duì)象中ADAM8和CEA的表達(dá)水平與性別或年齡無(wú)關(guān)（P>0.05）;

3、ADAM8在腺癌患者的表達(dá)水平[（462.54±161.38）pg/mL]與鱗癌[（449.04±118.03）pg/mL]相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）,而CEA在腺癌患者的表達(dá)水平[（20.93±10.57）ng/mL]比鱗癌[（8.31±4.50）ng/mL]高,經(jīng)比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;

參考文獻(xiàn)

[1]Expression of ADAM15 in lung carcinomas[J].Virchows Archiv.2005(4)

[2]Expression of ADAMs（a disintegrin and metalloproteases）and TIMP-3（tissue inhibitor of metalloproteinase-3）in human prostatic adenocarcinomas[J].Dev Karan,Frank Lin,Michael Bryan,J?erg Ringel,Nicolas Moniaux,Ming-Fong Lin,Surinder Batra.International Journal of Oncology.2003(5)

[3]Serum carcinoembryonic antigen level in surgically resected clinical stage i patients with non-small cell lung cancer[J].Noriyoshi Sawabata,Mitsunori Ohta,Shin-ichi Takeda,Hirotsugu Hirano,Yoshitomo Okumura,Hiroki Asada,Hajime Maeda.The Annals of Thoracic Surgery.2002(1)

[4]Detection of Micrometastatic Tumor Cells in pN0 Lymph Nodes of Patients With Completely Resected Nonsmall Cell Lung Cancer:Impact on Recurrence and Survival[J].Chun-Dong Gu,Toshihiro Osaki,Tsunehiro Oyama,Masaaki Inoue,Mantaro Kodate,Kazuhito Dobashi,Takeshi Oka,Kosei Yasumoto.Annals of Surgery.2002(1)

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