背景^[1-3]

干粉型LB培養(yǎng)基是一種培養(yǎng)基的名稱，生化分子實驗中一般用該培養(yǎng)基來預(yù)培養(yǎng)菌種，使菌種成倍擴增，達到使用要求。培養(yǎng)的菌種一般是經(jīng)過改造的無法在外界環(huán)境單獨存活和擴增的工程菌。通過培養(yǎng)工程菌，可以表達大量的外源蛋白，也可以拿到帶有外源基因的質(zhì)粒，工程菌的有效擴增是生化分子實驗的基礎(chǔ)。

配方：胰蛋白胨10g，酵母提取物5g，NaCl 10g。使用時加入1000ml水，高壓滅菌。

干粉型LB培養(yǎng)基

LB培養(yǎng)基是由美國科學(xué)家Giuseppe Bertani在1951年獨立開發(fā)。但現(xiàn)在常用的LB配方是由Miller修改而成,主要是去掉Glucose并把NaCl濃度從0.5 g/L增加到10 g/L。本產(chǎn)品就是根據(jù)Miller配方制備的干粉型培養(yǎng)基,本產(chǎn)品加水滅菌后即得液體培養(yǎng)基,即可使用。

使用方法

1.配制：100mlLB培養(yǎng)基加入1~1.5g瓊脂粉

2.抗生素的加入：高壓滅菌后，將融化的LB固體培養(yǎng)基置于55℃的水浴中，待培養(yǎng)基溫度降到55℃時（手可觸摸）加入抗生素，以免溫度過高導(dǎo)致抗生素失效，并充分搖勻。

3.倒板：一般15ml-20ml倒1個板子。培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿后，打開蓋子，在紫外下照10-15分鐘。

4.保存：用封口膠封邊，并倒置放于4℃保存，一個月內(nèi)使用。ph值需要控制在7.4

應(yīng)用^[4][5]

用于益生菌抑菌劑制備及應(yīng)用研究

選取研究室保藏的23株益生乳桿菌,抑菌圈試驗篩選出產(chǎn)抑菌劑的益生菌,16S rDNA方法對其進行菌種鑒定,單因素、PB（Plackett-Burman）試驗及響應(yīng)面法優(yōu)化確定該菌株產(chǎn)抑菌劑的發(fā)酵條件和最適培養(yǎng)基,真空冷凍干燥制備益生菌抑菌劑粉末,將其用于香蕉和冷鮮豬肉保藏。

結(jié)果如下:1.以金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、青霉、溶藻弧菌作為指示菌的抑菌圈試驗結(jié)果發(fā)現(xiàn),益生菌菌體對指示菌無抑制作用,離心去除益生菌菌體的發(fā)酵液（抑菌劑）對細菌有抑制作用,對青霉的抑制作用不明顯。初篩及復(fù)篩獲得了抑菌能力較強的益生乳桿菌L57,16S rDNA菌種鑒定為鼠李糖乳桿菌。

2. 抑菌試驗結(jié)果表明,鼠李糖乳桿菌L57抑菌劑具有廣譜性,對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、溶藻弧菌、納豆芽孢桿菌均有抑制作用,對青霉抑菌作用不明顯,對黑曲霉、釀酒酵母和保拉迪酵母無抑制作用。排除有機酸、過氧化氫及胞外多糖的干擾,硫酸銨鹽鹽析初步確定,該抑菌劑中具有抑菌作用的物質(zhì)是蛋白質(zhì)或肽類。理化性質(zhì)測定表明,該抑菌劑經(jīng)胰蛋白酶、胃蛋白酶和木瓜蛋白酶處理后的抑菌活性好,對p H、溫度和紫外線有良好的耐受性,抑菌活性顯示pH最適范圍為2.0-4.0。

3. 單因素、PB試驗及響應(yīng)面法優(yōu)化了鼠李糖乳桿菌L57產(chǎn)抑菌劑的發(fā)酵條件和培養(yǎng)基組成。發(fā)酵條件為:培養(yǎng)時間21h,溫度38℃,接種量5.0%,初始pH6.5,此條件下對大腸桿菌和金黃色葡萄球菌抑菌圈直徑分別為19.24mm和21.59mm,比對照組大腸桿菌抑菌圈直徑（17.46mm）和金黃色葡萄球菌抑菌圈直徑（19.21mm）分別提高了10.3%和12.4%;優(yōu)化培養(yǎng)基組成為:葡萄糖3.2%,大豆蛋白胨2.8%,乙酸鈉0.7%,低聚半乳糖0.2%,吐溫-80 2mL/L,磷酸氫二鉀0.3%,硫酸錳0.005%,此條件得到該菌產(chǎn)抑菌劑對大腸桿菌和金黃色葡萄球菌抑菌圈直徑分別為19.36mm和21.97mm,比對照組大腸桿菌抑菌圈直徑（12.35mm）和金黃色葡萄球菌抑菌圈直徑（15.64mm）分別提高了57%和41%。

4.鼠李糖乳桿菌L57的生長及產(chǎn)抑菌劑曲線表明,隨著菌體的生長,抑菌活性增強,發(fā)酵20h后抑菌活性趨于平緩;加入15%的可溶性淀粉冷凍干燥制備的抑菌劑粉,復(fù)水還原后抑菌性能與未干燥抑菌劑無顯著差異;Luria-Bertani（LB）培養(yǎng)基中抑菌劑凍干粉對大腸桿菌和金黃色葡萄球菌最小抑菌濃度（MIC）均為0.78g/L,最小殺菌濃度（MBC）分別為6.25 g/L和3.13 g/L。

參考文獻

[1]Revalorization of winery by-products as source of natural preservatives obtained by means of green extraction techniques[J].J.M.Poveda,L.Loarce,M.Alarcón,M.C.Díaz-Maroto,M.E.Ala?ón.Industrial Crops&Products.2018

[2]The four-component aureocin A70 as a promising agent for food biopreservation[J].Patrícia Carlin Fagundes,Felipe Miceli de Farias,Olinda Cabral da Silva Santos,Juliana Aparecida Souza da Paz,Hilana Ceotto-Vigoder,Daniela Sales Alviano,Maria Teresa Villela Romanos,Maria do Carmo de Freire Bastos.International Journal of Food Microbiology.2016

[3]Current trends in natural preservatives for fresh sausage products[J].Celia J.Hugo,Arno Hugo.Trends in Food Science&Technology.2015(1)

[4]Development of a rice starch-based coating with antioxidant and microbe-barrier properties and study of its effect on tomatoes stored at room temperature[J].Deba Krishna Das,Himjyoti Dutta,Charu Lata Mahanta.LWT-Food Science and Technology.2013(1)

[5]齊康儒.益生菌抑菌劑制備及應(yīng)用研究[D].陜西科技大學(xué),2018.