背景[1-3]
LNCAP CLONE FGC人前列腺癌細胞是從一位50歲白人男性(血型B+)的左鎖骨淋巴結(jié)針刺活檢中分離，該患者經(jīng)確診為前列腺癌轉(zhuǎn)移。LNCaP clone FGC細胞對5-α-二氫睪酮(生長調(diào)節(jié)子和酸性磷酸脂酶產(chǎn)物)有響應。LNCaP clone FGC細胞并不形成一致的單層，而是形成集落，在傳代時可以用滴管反復吹吸打碎。LNCaP clone FGC細胞僅僅輕輕地吸附在基底上，不形成匯合，很快使培養(yǎng)基變酸。LNCaP clone FGC細胞生長極其緩慢，傳代后48小時內(nèi)不應擾動。當培養(yǎng)瓶封包后，多數(shù)LNCaP clone FGC細胞從培養(yǎng)瓶底分離，懸浮在培養(yǎng)基中。
LNCAP CLONE FGC人前列腺癌細胞
培養(yǎng)步驟：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入5mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加4-6mL完全培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?cm皿中），培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
傳代方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2.加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上含10%血清的完全培養(yǎng)基終止消化。
3.輕輕吹打細胞，完全脫落后吸出，在1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.按5-6ml/瓶補加培養(yǎng)液，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含5-6 ml培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中。
應用[4][5]
用于基于前列腺膜抗原的腫瘤靶向喜樹堿前藥設(shè)計、合成及活性評價研究
在前藥原理指導下,以PSMA的特異性水解底物Asp-Glua*Glu*Glu*Glu（WT-H）、Asp-Glu*Glu*Asp-Glu（HT-H）和Glu*Glu*Glu*Asp-Glu（HT-J）（“*”表示γ-谷?；B接;“-”表示α-谷?；B接）作為腫瘤靶向配體,將其與喜樹堿20位羥基通過不同的連接片段連接,設(shè)計并合成12種全新的水溶性腫瘤靶向喜樹堿前藥CPT-X;
同時為了更好地研究前藥的PSMA靶向性,合成8種前藥CPT-X的PSMA代謝產(chǎn)物CPT-MX;采用PSMA過表達的人前列腺癌LNCaP-FGC（PSMA+）細胞和多種PSMA陰性表達的腫瘤細胞（MCF-7、HepG2、Hela、PC-3和DU145）和人正常肝細胞（L02）評價CPT-X和CPT-MX的細胞毒活性和PSMA靶向性;
采用流式細胞分析和激光共聚焦顯微鏡進一步驗證前藥CPT-W12的細胞毒選擇性和PSMA靶向性;利用重組人PSMA和人乳腺癌細胞MCF-7裸鼠移植瘤模型,采用高效液相色譜法和小動物活體成像系統(tǒng),評價前藥CPT-W12的體外靶向釋放和體內(nèi)靶向分布特性;
采用BALB/c小鼠評價前藥CPT-W12在小鼠體內(nèi)的藥代動力學特性;采用人乳腺癌細胞MCF-7裸鼠移植瘤模型評價前藥CPT-W12的體內(nèi)抗腫瘤活性和安全性;采用免疫組化研究前藥CPT-W12對腫瘤組織中Ki-67、Caspase-3、Bcl-2和MMP-2蛋白表達情況的影響,探討其可能的抗腫瘤作用機制。
參考文獻
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[2]Self‐Assembly of an Amphiphilic Janus Camptothecin–Floxuridine Conjugate into Liposome‐Like Nanocapsules for More Efficacious Combination Chemotherapy in Cancer[J].Xiaolong Liang,Chuang Gao,Ligang Cui,Shumin Wang,Jinrui Wang,Zhifei Dai.Advanced Materials.2017(40)
[3]Redox-responsive molecular gels based on camptothecin prodrug with disulfide linkage for controlled and sustained drug release[J].Xiupeng Chang,Youmei Li,Shu Chen,Feng He,Renxi Zhuo.Wuhan University Journal of Natural Sciences.2017(5)
[4]Combination of amino acid/dipeptide with ligustrazine-betulinic acid as antitumor agents[J].Bing Xu,Wen-Qiang Yan,Xin Xu,Gao-Rong Wu,Chen-Ze Zhang,Yao-Tian Han,Fu-Hao Chu,Rui Zhao,Peng-Long Wang,Hai-Min Lei.European Journal of Medicinal Chemistry.2017
[5]徐冰.基于前列腺膜抗原的腫瘤靶向喜樹堿前藥設(shè)計、合成及活性評價[D].北京中醫(yī)藥大學,2019.