背景^[1-3]

絲裂原活化蛋白激酶P38(抗體)是一類以絲裂原活化蛋白激酶P38為抗原的多克隆抗體，可以特異性結(jié)合絲裂原活化蛋白激酶P38，主要用于檢測(cè)絲裂原活化蛋白激酶P38的Western Blot、IHC-P、IF、ELISA、Co-IP等多種免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)。

絲裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase，MAPK）是一組能被不同的細(xì)胞外刺激，如細(xì)胞因子、神經(jīng)遞質(zhì)、激素、細(xì)胞應(yīng)激及細(xì)胞黏附等激活的絲氨酸-蘇氨酸蛋白激酶。由于MAPK是培養(yǎng)細(xì)胞在受到生長(zhǎng)因子等絲裂原刺激時(shí)被激活而被鑒定的，因而得名。

所有的真核細(xì)胞都能表達(dá)MAPK。MAPK通路的基本組成是一種從酵母到人類都保守的三級(jí)激酶模式，包括MAPK激酶激酶（MAP kinase kinase kinase，MKKK）、MAPK激酶（MAP kinase kinase，MKK）和MAPK，這三種激酶能依次激活，共同調(diào)節(jié)著細(xì)胞的生長(zhǎng)、分化、對(duì)環(huán)境的應(yīng)激適應(yīng)、炎癥反應(yīng)等多種重要的細(xì)胞生理/病理過(guò)程。

抗原與抗體能夠特異性結(jié)合是基于抗原決定簇（表位）和抗體超變區(qū)分子間的結(jié)構(gòu)互補(bǔ)性與親和性。這種特性是由抗原、抗體分子空間構(gòu)型所決定的。除兩者分子構(gòu)型高度互補(bǔ)外，抗原表位和抗體超變區(qū)必須密切接觸，才有足夠的結(jié)合力。

抗原抗體反應(yīng)可分為兩個(gè)階段：階段為抗原與抗體發(fā)生特異性結(jié)合的階段，此階段反應(yīng)快，僅需幾秒至幾分鐘，但不出現(xiàn)可見(jiàn)反應(yīng)；

第二階段為可見(jiàn)反應(yīng)階段，這一階段抗原抗體復(fù)合物在適當(dāng)溫度、pH、電解質(zhì)和補(bǔ)體影響下，出現(xiàn)沉淀、凝集、細(xì)胞溶解、補(bǔ)體結(jié)合介導(dǎo)的肉眼可見(jiàn)的反應(yīng)，此階段反應(yīng)慢，往往需要數(shù)分鐘至數(shù)小時(shí)。

應(yīng)用^[4][5]

用于p38絲裂原活化蛋白激酶作用蛋白質(zhì)的篩選、鑒定與初步研究

認(rèn)識(shí)與p38激酶相作用結(jié)合的蛋白質(zhì)不僅有助于闡明p38激酶信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑中由傳導(dǎo)子所組成的蛋白質(zhì)群，而且有助于揭示可能和p38激酶產(chǎn)生相互作用的新關(guān)系。

生物質(zhì)譜技術(shù)和蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)的發(fā)展及其與其他生化手段的有效結(jié)合，使得對(duì)極微量樣本進(jìn)行蛋白質(zhì)的分離與鑒定變得相對(duì)容易得多，這種技術(shù)上的進(jìn)步為研究蛋白質(zhì)提供了無(wú)可比擬的強(qiáng)大手段，對(duì)深入研究信號(hào)分子成為可能。

在試驗(yàn)設(shè)計(jì)中將生物質(zhì)譜技術(shù)與蛋白質(zhì)免疫共沉淀試驗(yàn)有效結(jié)合，通過(guò)蛋白質(zhì)免疫共沉淀試驗(yàn)得到與靶標(biāo)蛋白p38共沉淀下來(lái)的蛋白質(zhì)復(fù)合物，經(jīng)過(guò)電泳分離后，由生物質(zhì)譜鑒定，繪出能夠與p38激酶結(jié)合的蛋白質(zhì)譜。

實(shí)驗(yàn)證實(shí)這種方法簡(jiǎn)便而有效。經(jīng)LPS刺激后的內(nèi)毒素休克組或失血性休克組和對(duì)照組組織裂解液，通過(guò)純化的p38重組蛋白親和柱，能夠與p38激酶結(jié)合的蛋白質(zhì)得以共沉淀分離。隨后進(jìn)行一維凝膠電泳(sodium dodecyt SulPhate一polyacrylaJ叮lde gel elec加Phoresis，SDS-P AGE)分離，顯色。

再在胰酶膠內(nèi)酶解基礎(chǔ)上，應(yīng)用生物質(zhì)譜(matrix.asslsted laser desorptio可ioaization一t五ne of flight.masssPectrometly，MALDI一TOF Ms)鑒定分離出來(lái)的蛋白質(zhì)群。

結(jié)果發(fā)現(xiàn)休克組肺組織有兩條蛋白帶發(fā)生顯著變化，在體外與p38直接結(jié)合，經(jīng)膚質(zhì)譜圖鑒定為c一反應(yīng)蛋白(c一~tive protein，CRP)和內(nèi)源性p38;休克動(dòng)物心臟組織有兩種蛋白能夠與p38相互作用，經(jīng)鑒定其中一種為三磷酸腺昔(adenosine城phosPhate，ATP)合成酶Q鏈。

參考文獻(xiàn)

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[3]protects the cells from assembly of the terminal complement components,and sustains an anti-inflammatory innate immune response:implications for sustemic autoimmunity.cells.The Journal of Experimental Medicine.2000

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