ASPC-1細(xì)胞的簡介[1]
ASPC-1細(xì)胞來源于人胰腺癌病人的腹水中的細(xì)胞裸鼠異種移植產(chǎn)生的癌性腹水，可以表達(dá)CEA，人胰腺相關(guān)抗原、人胰腺特異性抗原和黏蛋白。
ASPC-1細(xì)胞細(xì)胞傳代[1]
1）細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時，棄25cm2 培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS 清洗細(xì)胞一次；
2）添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml 至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后加入5ml 完全培養(yǎng)液終止消化，再輕輕吹打細(xì)胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml 離心管中，1000rpm 離心5min；
3）棄上清，沉淀細(xì)胞用1-2ml 完全培養(yǎng)基重懸，然后按1:2 比例進(jìn)行分瓶傳代，最后放入37℃，5%CO2 細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
ASPC-1細(xì)胞細(xì)胞凍存[1]
1）細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時，棄25cm2 培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS 清洗細(xì)胞一次；
2）添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml 至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后加入完全培養(yǎng)液終止消化，輕輕吹打細(xì)胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml 離心管中，1000rpm 離心5min；
3）用適量的凍存液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸細(xì)胞，并放置于凍存管中；
4）先將細(xì)胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃過夜，24h 后轉(zhuǎn)入液氮中進(jìn)行長期保存。使用程序降溫盒可直接放入-80℃。
ASPC-1細(xì)胞細(xì)胞復(fù)蘇[1]
1）從液氮中取出細(xì)胞凍存管（注意：佩戴防爆管面具），快速將其置入37℃水浴中解凍，直至凍存管中無結(jié)晶，然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁；
2）將凍存管中的細(xì)胞移至含6ml 完全培養(yǎng)基的15ml 離心管中， 1000rpm 離心5min；
3）棄上清，沉淀用6ml完全培養(yǎng)基重懸，接種25cm2 培養(yǎng)瓶，于37℃，5%CO2 細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
主要參考文獻(xiàn)
[1] 劉智文 肖衛(wèi)東 李勇 文武 王福飛；胰腺癌AsPC-1細(xì)胞中miR-148a/b靶基因DNA甲基轉(zhuǎn)移酶1的鑒定?！吨腥A實(shí)驗(yàn)外科雜志》