T4 DNA Polymerase

T4 DNA Polymerase，即T4 DNA聚合酶，是一種模板依賴的DNA聚合酶，可以在結(jié)合有引物的單鏈DNA 模板上，從
5'→3'方向催化DNA合成反應(yīng)。T4 DNA Polymerase具有3'→5'外切酶活性，但不具有5'→3'外切酶活性。
特點(diǎn)：T4 DNA Polymerase由于同時(shí)具有5'→3'DNA聚合酶活性和3'→5'DNA外切酶活性，可以用于將5'端突出末端補(bǔ)平或3'端突出末端削平。T4 DNA Polymerase的3'→5'DNA外切酶活性對(duì)于單鏈DNA要比雙鏈DNA活性更高，即單鏈DNA要比雙鏈DNA中的非配對(duì)鏈部分更容易被T4 DNA Polymerase所消化。T4 DNA Polymerase的3'→5'外切酶活性比Klenow Fragment要高約200倍。
用途：T4 DNA Polymerase可用于催化以下反應(yīng)：DNA 5'或3'突出末端的平滑化；通過置換反應(yīng)進(jìn)行標(biāo)記DNA探針合成；定點(diǎn)突變過程中第二鏈的合成；不依賴于連接反應(yīng)的PCR產(chǎn)物克隆。
來源：本T4 DNA Ligase由大腸桿菌表達(dá)，表達(dá)基因的來源為T4嗜菌體。
活性定義：37℃30分鐘時(shí)間內(nèi)，催化10nmol脫氧核糖核苷酸(dNTPs)摻入到多聚核苷酸中所需的酶量定義為1個(gè)活性單位。
活性檢測(cè)條件：67mM Tris-HCl(pH8.8)，6.7mM MgCl₂，1mM DTT，16.7mM(NH₄)₂SO₄，0.2mg/ml BSA，
0.033mM of each dNTP，0.4MBq/ml[³H]-dTTP，0.2mM 熱變性且經(jīng)DNA酶部分消化過的小牛胸腺DNA。
純度：不含DNA內(nèi)切酶，不含RNase。
酶儲(chǔ)存溶液：20mM potassium phosphate(pH7.5)，200mM KCl，2mM DTT，and 50% glycerol。
Reaction Buffer(5X)：335mM Tris-HCl(pH8.8 at 25℃)，33mM MgCl₂，5mM DTT，84mM
(NH₄)₂SO₄。
緩沖液兼容性：在信裕生物的內(nèi)切酶反應(yīng)緩沖液1X O、1X R、1X Y、2X Y中的活性為100%，在1X B、1X G中的活性為75-100%。
失活或抑制：70℃加熱10分鐘可使T4 DNA Polymerase失活。金屬離子螯合劑可以抑制T4 DNA Polymerase的活性。
包裝清單：

保存條件：
-20℃保存。
注意事項(xiàng)： 
酶使用時(shí)宜存放在冰盒內(nèi)或冰浴上，使用完畢后宜立即放置于-20℃保存。
本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

使用說明：
1. DNA 5'或3'突出末端平滑化：
a. 參考如下表格設(shè)置反應(yīng)體系：

b. 按上表設(shè)置好反應(yīng)體系后，輕輕混勻(可以用移液器吹打混勻或用Vortex在最低速度輕輕混勻)，隨后離心沉淀液體。
c. 11℃孵育20分鐘，或室溫(20-25℃)孵育5分鐘。
d. 70℃孵育10分鐘終止反應(yīng)。
2. 其他用途請(qǐng)自行參考T4 DNA Polymerase的相關(guān)文獻(xiàn)資料進(jìn)行。