中文名：Recombinant Taq DNA Polymerase Protein
英文名：Recombinant Taq DNA Polymerase Protein
中文別名：DNA polymerase I; thermostable; DNA-directed DNA polymerase; Taq DNA 聚合酶; 不含DNA的Taq DNA 聚合酶; TAQ DNA 聚合酶
純度：>95%
貨號(hào)：A156186
包裝：1000u
Cas號(hào)：9012-90-2
存儲(chǔ)溫度：-20°C儲(chǔ)存,避免反復(fù)凍融
產(chǎn)品介紹：
產(chǎn)品描述：
Taq DNA Polymerase簡稱Taq酶，是最常用的DNA聚合酶之一。
Taq DNA Polymerase是一種來源于嗜熱菌Thermus aquaticus的高度熱穩(wěn)定的DNA聚合酶，分子量是94 kDa ，是將Thermus aquaticus DNA Polymerase 的基因重組表達(dá)后，分離提取而得到的。
產(chǎn)品內(nèi)容：
1.???? Taq DNA Polymerase ( 5 U/μL )
2.? ? ?10×Taq Buffer（Mg2+Plus）：200mM Tris-HCl,500mM KCl,20mM MgCl2,1mM DTT,pH9.3
活性定義：
一個(gè)單位的?Taq?DNA 聚合酶是在74° C 下30分鐘內(nèi)將10nmol 脫氧核苷酸摻入 DNA 中所需的酶量 。
使用方法：
1.???? PCR反應(yīng)體系
試劑 | 體積 |
10×Taq Buffer(Mg2+ Plus) | 5μL |
dNTP Mixture(2.5mM each) | 4μL |
Template DNA | ＜500 ng |
Primer F | 0.2-1.0 μM |
Primer R | 0.2-1.0 μM |
Taq DNA Polymerase(5U/μL) | 0.2μL |
ddH2O | Up to 50μL |
2.???? PCR反應(yīng)參數(shù)的設(shè)置以擴(kuò)增 1Kb 目的片段為例
步驟 | 溫度℃ | 時(shí)間 | 循環(huán)數(shù) | 預(yù)變性 | 95 | 5min | 1 | 變性 | 95 | 30s | 25-35 | 退火 | 55~55(depending on primer Tm) | 30s | 延伸 | 72 | 1min/kb | 最后延伸 | 72 | 10min | 1 | Hold | 4 | ∞ | 1 |
| | | | | | | | ? | |
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2.1 ?PCR 反應(yīng)的設(shè)置需根據(jù)模板、引物、PCR 產(chǎn)物的長度和 GC 含量等條件的不同設(shè)定不同的 PCR 反應(yīng)條件包括溫度、時(shí)間和循環(huán)數(shù)等。
2.2 ?STEP4(延伸)的時(shí)間設(shè)置需根據(jù) PCR 產(chǎn)物的長度進(jìn)行設(shè)置，通常每 kb 產(chǎn)物的延伸時(shí)間為 1min。例如PCR 產(chǎn)物的長度為 1kb，則延伸時(shí)間可以設(shè)置為 1min，PCR 產(chǎn)物的長度為 2kb，則延伸時(shí)間可以設(shè)置為 2min，以此類推。
2.3? 對(duì)于初次進(jìn)行的 PCR，為盡量確?？梢詳U(kuò)增出預(yù)期的 PCR 產(chǎn)物，可以把循環(huán)數(shù)設(shè)置為 35。對(duì)于需進(jìn)行半定量或定量的 PCR 反應(yīng)循環(huán)數(shù)一定要進(jìn)行適當(dāng)優(yōu)化，使 PCR 反應(yīng)沒有達(dá)到平臺(tái)期。
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關(guān)鍵字： DNA polymerase I; thermostable; DNA-directed DNA polymerase; Taq DNA 聚合酶; 不含DNA的Taq DNA 聚合酶; TAQ DNA 聚合酶
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