超氧陰離子(Oxygen free radical, OFR)試劑盒說(shuō)明書 

分光光度法 50 管/48 樣

正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定 

測(cè)定意義：

生物體內(nèi)超氧陰離子等活性氧具有免疫和信號(hào)傳導(dǎo)的作用，但積累過(guò)多時(shí)會(huì)對(duì)細(xì)胞膜及生物大分子產(chǎn) 生破壞作用，導(dǎo)致機(jī)體細(xì)胞和組織代謝異常，從而引起多種疾病。 

測(cè)定原理：

超氧陰離子與鹽酸羥胺反應(yīng)生成 NO2－，NO2－在對(duì)氨基苯磺酸和α－萘胺的作用下，生成紅色的偶氮化 合物，在 530nm 處有特征吸收峰，根據(jù)ΔA 值可以計(jì)算樣品中 O2－含量，反應(yīng)式為 NH2OH + 2O2－ ＋H ＋ → NO2－ ＋ H2O2 ＋ H2O。

自備儀器和用品： 

天平、水浴鍋、離心機(jī)、可見分光光度計(jì)、1 ml 玻璃比色皿、氯仿和蒸餾水。

超氧陰離子提取： 

1、植物、動(dòng)物組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織， 加入 1ml 提取液）進(jìn)行冰浴勻漿，然后 10000g，4℃，離心 20min，取上清置于冰上待測(cè)。。

2、細(xì)菌、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（10 4個(gè)）：提取液體積（ml）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬(wàn)細(xì) 胞加入 1ml 提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率 300w，超聲 3 秒，間隔 7 秒，總時(shí)間 3min）；然后 10000g， 4℃，離心 20min，取上清置于冰上待測(cè)。

3、血清或培養(yǎng)液：直接測(cè)定。