血磷濃度檢測試劑盒（UW5-1, 50T/48S）說明書

                                                分光光度法50管/48樣

注    意：正式測定之前選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。

血磷濃度檢測試劑盒（UW5-1, 50T/48S）試劑盒測定意義：

血磷主要指血中的無機(jī)磷，以無機(jī)磷鹽的形式存在。血漿中鈣、磷濃度關(guān)系密切，在以mg/dL表示時，二者的乘積(［Ca］×［P］)為30～40。當(dāng)(［Ca］×［P］)>40，則鈣和磷以骨鹽形式沉積于骨組織；若(［Ca］×［P］)<35則妨礙骨的鈣化，甚至可使骨鹽溶解，影響成骨作用。血鈣和血磷含量的相對穩(wěn)定依賴于鈣、磷的吸收與排泄和鈣化及脫鈣兩種代謝的相對平衡。上述平衡受到維生素D3、甲狀旁腺素和降鈣素等激素的調(diào)節(jié)。

測定原理：

去除血清中有機(jī)磷后，無機(jī)磷鹽與鉬酸銨試劑生成磷鉬酸，被硫酸亞鐵還原后呈藍(lán)色，在620nm有光吸收；通過測定620 nm吸光度，計(jì)算血液中磷含量。

自備儀器和用品：

可見分光光度計(jì)、離心機(jī)、可調(diào)式移液槍、1mL玻璃比色皿和蒸餾水。

血磷濃度檢測試劑盒（UW5-1, 50T/48S）試劑盒試劑組成和配置：

試劑一：液體62.5mL×1瓶，4℃保存。

試劑二：液體3.1mL×1瓶，4℃保存。

試劑三：粉劑×1瓶，4℃保存。臨用前配制，依次加入22 mL蒸餾水充分溶解，再加入試劑二，充分混合。

標(biāo)準(zhǔn)液：液體1mL×1支，0.02 m mol/L無機(jī)磷，4℃保存。

血磷濃度測定操作：

1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30min，調(diào)節(jié)波長到620 nm，蒸餾水調(diào)零。

2. 取出標(biāo)準(zhǔn)液，室溫解凍。

3. 血清預(yù)處理：吸取50 μL血清，加950μL試劑一，混勻后室溫8000rpm，離心10min，取上清液，待測。

4. 空白管：取1mL玻璃比色皿，依次加入250μL蒸餾水，250μL試劑一，500μL試劑三，混勻后靜置10min，于620 nm測定吸光度，記為A空白管。

5.標(biāo)準(zhǔn)管：取1mL玻璃比色皿，依次加入250μL標(biāo)準(zhǔn)液，250μL試劑一，500μL試劑三，混勻后靜置10min，于620 nm測定吸光度，記為A標(biāo)準(zhǔn)管。

6. 測定管：取1mL玻璃比色皿，依次加入250μL上清液，250μL試劑一，500μL試劑三，混勻后靜置10min，于620 nm測定吸光度，記為A測定管。

注意：空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測定一次。

血磷濃度計(jì)算：

血磷含量（m mol/dL）=[C標(biāo)準(zhǔn)液×(A測定管－A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管)]×樣品稀釋倍數(shù)×V樣總=0.04×(A測定管－A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管)

C標(biāo)準(zhǔn)液：0.02 mmol/L；樣品稀釋倍數(shù)：（50 μL血清+950μL試劑一）÷50 μL血清=20；V樣總：100 mL=0.1

L。

血磷濃度檢測試劑盒（UW5-1, 50T/48S）試劑盒注意事項(xiàng)：

1. 試劑三需臨用前配制，如未用完，4℃保存，最多可使用3天；

2. 測定過程中，應(yīng)盡量避免溶血，因?yàn)榧t細(xì)胞中有機(jī)磷酯進(jìn)入血清后可被酶水解而使得血清無機(jī)磷含量增高。

3. 采血后宜盡早進(jìn)行血清磷測定，時間過長會影響血清磷含量。

4. 最低檢出限為10μmol/L。