脂肪肝，也稱為脂肪性肝病，是一種以細胞內(nèi)脂質(zhì)異常積累為特征的病理過程。雖然單純的脂肪肝可能與肝功能的顯著損害無關(guān)，但過多的脂肪積累可能導(dǎo)致肝硬化甚至肝衰竭。非酒精性脂肪肝的分子機制尚不清楚，關(guān)于脂質(zhì)積累后導(dǎo)致肝細胞損傷進展的途徑（s）的信息也很少。確定肝毒性是藥物發(fā)現(xiàn)過程中的一個重要組成部分，其中包括脂肪肝作為評估的關(guān)鍵參數(shù)之一。Cayman的脂肪肝比色測定試劑盒提供了一個方便的工具，用于評估藥物候選物的脂肪肝風(fēng)險。在這個測定中，使用油紅O染色肝細胞中的中性脂質(zhì)。然后，在染料從脂滴中提取后，使用板讀數(shù)器對脂質(zhì)積累進行定量。試劑盒中包含氯喹作為陽性對照。
需要但未提供的：請下載試劑盒手冊，以驗證是否需要超純水（Milli-Q或等效物）或該測定的其他任何組分。
警告：本品不適用于人類或獸醫(yī)用途。
艾美捷Cayman的脂肪變性比色分析試劑盒（#10012643-1），用于評估使用油紅O染色肝細胞中性脂質(zhì)的候選藥物的乳糖病風(fēng)險。從脂滴中提取液后，可以使用平板讀數(shù)器定量脂質(zhì)積聚。試劑盒中包含氯喹作為陽性對照，用于篩選誘導(dǎo)肝細胞脂肪變性的候選藥物。
脂肪變性比色分析試劑盒測定方案：
板配置
在板孔的使用上沒有特定的模式?？梢允褂?2孔、24孔或96孔板。一個典型的實驗板將包括沒有細胞的孔和用實驗化合物或載體處理的細胞孔。我們建議每個處理進行三次重復(fù)。我們建議您在提供的模板表上記錄每個孔的內(nèi)容。
細胞處理：
以下方案是為96孔板設(shè)計的。對于其他板型，應(yīng)相應(yīng)調(diào)整每個孔施加的培養(yǎng)基/溶液體積。
1. 在96孔板中每孔播種10?個細胞。培養(yǎng)細胞過夜。
2. 第二天，用實驗化合物或載體處理細胞72小時，或根據(jù)您的典型實驗方案使用的時間。氯喹，一種已知能誘導(dǎo)脂肪肝的化合物，作為試劑盒中的陽性對照。推薦的濃度是25μM。在這個濃度下，經(jīng)過72小時的處理后，應(yīng)該可以觀察到脂滴積累的顯著誘導(dǎo)。
3. 結(jié)束實驗，并使用下面描述的脂滴染色程序檢查實驗化合物對脂肪肝的影響。
細胞內(nèi)脂滴的分布
下圖展示了使用本試劑盒在肝細胞中觀察到的脂質(zhì)積累的典型染色示例。您的結(jié)果可能會根據(jù)所接種的細胞數(shù)量和脂質(zhì)積累的程度而有所不同。
圖：氯喹對HepG2細胞脂滴積累的影響。HepG2細胞以每孔10?個細胞的密度在96孔板中接種，并在37°C孵化器中過夜培養(yǎng)。第二天，細胞用載體或不同劑量的氯喹處理三天。A組：用載體處理的HepG2細胞。細胞中有一些脂滴，表現(xiàn)為紅色點狀。B組：用25μM氯喹處理的HepG2細胞顯示出脂滴的顯著積累，這通過油紅O染色觀察到的大量紅色點狀明顯可見。
脂肪變性比色分析試劑盒文獻參考：
1.Burt,AD.Steatosis and steatohepatitis.Current Diagnostic Pathology 7,141-147(2001).
2.Donohue,T.M,r.Alcohol-induced steatosisin liver cells.World JGastroenterol.13(37),4974-4978(2007).
3.Adams,LA,Angulo,P,and Lindor,KD.Nonalcoholic fatty liver disease.CMAJ 172(7),899-905(2005).
4.Non-clinical guideline on drug-induced hepatotoxicity.(2006).
https://www.amyjet.com/products/10012643-1.shtml