ACROBiosystems百普賽斯致力于開(kāi)發(fā)高質(zhì)量的、應(yīng)用于CGT臨床階段的相關(guān)試劑/原料，基于完善的GMP質(zhì)量管理體系，現(xiàn)全新推出GMP級(jí)別重組DLL4蛋白（貨號(hào)：GMP-DL4H28），具有高活性、高安全性等，可用于Feeder-cell free培養(yǎng)方案下的iPSC-T細(xì)胞誘導(dǎo)分化過(guò)程中，更好支持iPSC大規(guī)模臨床生產(chǎn)。
以CAR-T為代表的細(xì)胞免疫療法，已在多種血液惡性腫瘤的治療中表現(xiàn)出優(yōu)秀的臨床效果，目前已有多款CAR-T藥物獲批上市，其中，T淋巴細(xì)胞是細(xì)胞免疫療法藥物開(kāi)發(fā)的關(guān)鍵介質(zhì)，然而主流的自體細(xì)胞療法存在一些明顯的關(guān)鍵性障礙，如T細(xì)胞不易獲取（淋巴細(xì)胞減少癥患者）、大規(guī)模制造困難以及無(wú)法通用性治療等問(wèn)題，因此，獲取足夠數(shù)量的T細(xì)胞用于臨床生產(chǎn)至關(guān)重要。為克服這一挑戰(zhàn)，相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，可通過(guò)多種細(xì)胞類(lèi)型來(lái)衍生獲取T細(xì)胞，如臍帶血（UCB）造血干細(xì)胞、骨髓（BM）造血干細(xì)胞、胚胎干細(xì)胞(ESC)、誘導(dǎo)多能干細(xì)胞（iPSC）等來(lái)源，其中，iPSCs因其獨(dú)特的自我更新特性以及被基因工程編輯的能力，有潛力提供T細(xì)胞的可再生來(lái)源，為細(xì)胞治療提供“無(wú)限供應(yīng)”的平臺(tái)。
DLL4在iPSC- T誘導(dǎo)分化中的關(guān)鍵作用
經(jīng)典的iPSC來(lái)源T細(xì)胞分化方案是將來(lái)自健康供體的iPSCs與小鼠骨髓基質(zhì)細(xì)胞系OP9共培養(yǎng)，以產(chǎn)生CD34+的造血祖細(xì)胞，然后被富集后與特定生長(zhǎng)因子（如SCF、Flt3、IL-7、IL-3、TPO）和過(guò)表達(dá)DLL1或DLL4的OP9細(xì)胞系共培養(yǎng)，啟動(dòng)T細(xì)胞分化，最終得到iPSC誘導(dǎo)分化的T細(xì)胞。
我們不難注意到DLL4/DLL1在整個(gè)分化過(guò)程中起到了關(guān)鍵作用，這主要是因?yàn)門(mén)細(xì)胞分化依賴(lài)Notch信號(hào)通路來(lái)完成。實(shí)際上，Notch受體-配體相互作用決定了多個(gè)細(xì)胞譜系的發(fā)育過(guò)程，尤其在T淋巴細(xì)胞生成過(guò)程中，幾乎完全是由 Notch1 和 Delta 樣 (DLL)4相互作用來(lái)介導(dǎo)，在上述iPSC誘導(dǎo)分化培養(yǎng)過(guò)程中，HPC上表達(dá)的受體 Notch1與OP9-DL細(xì)胞上表達(dá)的DLL4/DLL1相互作用，從而誘導(dǎo)一系列T細(xì)胞譜系分化步驟。
不過(guò)在體外培養(yǎng)時(shí)，DLL4 和DLL1 均顯示支持 T 淋巴細(xì)胞生成, 為了確定哪種 DLL在體外誘導(dǎo)造血祖細(xì)胞產(chǎn)生T譜系細(xì)胞方面更有效，有研究團(tuán)隊(duì)做了更深入研究，他們制備了一系列表達(dá)水平(lo/med/hi)的DLL4和DLL1的OP9 細(xì)胞，用于HPC向T細(xì)胞的誘導(dǎo)分化中，結(jié)果顯示，盡管 OP9-DL4hi和OP9-DL4med 細(xì)胞上的Dll4-HA的細(xì)胞表面蛋白水平分別低于OP9-DL1hi和OP9-DL1med上的 DLL11-HA 水平，但表達(dá)DLL4 的細(xì)胞能更有效地支持T細(xì)胞生成，這表明DLL4在HPC向T淋巴細(xì)胞誘導(dǎo)方面比DLL1更有效。
所以，OP9-DL是iPSC-T誘導(dǎo)分化中必不可缺的材料，但使用鼠源基質(zhì)細(xì)胞系及一些未定義的某些提取物會(huì)導(dǎo)致安全性問(wèn)題而被限制臨床應(yīng)用，目前，基于重組DLL4蛋白的Feeder-cell free培養(yǎng)已成為臨床iPSC規(guī)模化生產(chǎn)的主流方案，如使用板子結(jié)合Notch配體DLL4和一些粘附分子（如VCAM-1），具有更好的臨床轉(zhuǎn)化潛力，更有研究團(tuán)隊(duì)考慮到板結(jié)合的方法受到組織培養(yǎng)板表面積的限制，認(rèn)為這依舊對(duì)大規(guī)模生產(chǎn)提出了挑戰(zhàn)，開(kāi)發(fā)出基于DLL4微珠的Feeder-cell free體外系統(tǒng)，來(lái)更好支持iPSC大規(guī)模懸浮培養(yǎng)。
總結(jié)
iPSC-T細(xì)胞作為“現(xiàn)貨型”的T細(xì)胞來(lái)源，可用作下游如CAR轉(zhuǎn)導(dǎo)、TCR工程化構(gòu)建修飾等生產(chǎn)中，有研究顯示，基于Feeder-cell free條件，能達(dá)到1L約2 × 1010個(gè)的iT細(xì)胞培養(yǎng)水平，這個(gè)數(shù)字足以進(jìn)行安全性評(píng)估的初步臨床試驗(yàn)，且相比于自體T細(xì)胞，更有解決同種異體細(xì)胞治療引起的免疫排斥反應(yīng)的優(yōu)勢(shì)，iPSC-T細(xì)胞或?qū)⒊蔀門(mén)細(xì)胞免疫療法的理想通用細(xì)胞源。iPSC誘導(dǎo)分化對(duì)T細(xì)胞的體外規(guī)?；a(chǎn)和持續(xù)進(jìn)步產(chǎn)生了巨大的影響，隨著對(duì)其質(zhì)量控制和誘導(dǎo)分化工藝的不斷優(yōu)化，iPSC有望在免疫療法領(lǐng)域釋放巨大潛力。
明星產(chǎn)品—GMP級(jí)別重組DLL4蛋白
ACROBiosystems百普賽斯致力于開(kāi)發(fā)高質(zhì)量的、應(yīng)用于CGT臨床階段的相關(guān)試劑/原料，基于完善的GMP質(zhì)量管理體系，現(xiàn)全新推出GMP級(jí)別重組DLL4蛋白（貨號(hào)：GMP-DL4H28），具有高活性、高安全性等，可用于Feeder-cell free培養(yǎng)方案下的iPSC-T細(xì)胞誘導(dǎo)分化過(guò)程中，更好支持iPSC大規(guī)模臨床生產(chǎn)。