產(chǎn)品簡介
衍生化主要是為了提高目標(biāo)物質(zhì)的可檢測性，提高檢測器對目標(biāo)物質(zhì)的響應(yīng)。在弱堿溶液中，OPA和3-MPA能夠與氨基酸中的羰基和氨基發(fā)生反應(yīng)，生成衍生物并通過紫外光激發(fā)后，發(fā)射出比激發(fā)光波長更長的光，稱為熒光。衍生物的熒光強(qiáng)度與其濃度成正比，從而可以計(jì)算出樣品中氨基酸的含量。這種方法具有測定快速、準(zhǔn)確度高、靈敏度高、適用范圍廣等優(yōu)點(diǎn)。
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組分
實(shí)驗(yàn)步驟
一、實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備工作
1. 流動(dòng)相A的配制：取適量的超純水分別在瓶內(nèi)溶解流動(dòng)相A1、A2和A3，溶解后的流動(dòng)相A1、A2和A3移至1L容量瓶中，并用適量的超純水沖洗流動(dòng)相A1、A2和A3的瓶壁1-2次并移至上述1L容量瓶中，以保證瓶內(nèi)試劑充分被溶解移出，最后用超純水將容量瓶定容至1L?；靹颍^0.22 μm有機(jī)相膜后待用。
2. 流動(dòng)相B的配制：取適量的超純水在瓶內(nèi)溶解流動(dòng)相B，溶解后的流動(dòng)相B移至1L容量瓶中，并用適量的超純水沖洗流動(dòng)相B的瓶壁1-2次并移至上述容量瓶中，然后加入400 mL的色譜級甲醇和400 mL的色譜級Y腈，最后用超純水定容上述容量瓶至1L?；靹?，過0.22 μm有機(jī)相膜后待用。
3. 將配制好的流動(dòng)相A、B超聲30 min，除去溶劑中的氣體，防止阻塞色譜柱，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
4. 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制（標(biāo)準(zhǔn)品需用戶自備）：取一定量氨基酸標(biāo)準(zhǔn)品，用0.1M HCl溶解為100 μg/mL或1mM的標(biāo)準(zhǔn)溶液，過0.22 μm水相膜。
5. 衍生試劑的配制：取60 mg試劑一加入0.5 mL試劑二、4.5 mL試劑三和50μL試劑四，混勻，避光待用。按此配制可以獲得約5mL的衍生化試劑，可以進(jìn)行25次手動(dòng)衍生，實(shí)際操作時(shí)需根據(jù)具體需求等倍增加或減少配制量。
二、測定步驟
1. 開啟電腦、打開液相色譜儀各模塊開關(guān)按鈕（使用 FLD 檢測器），安裝上 C18 色譜柱（4.6×250 mm，耐水性≥90%），打開軟件，在方法組中設(shè)置柱溫為 35℃，流速為 1 mL/min，激發(fā)波長（λex）為 340 nm，發(fā)射波長（λem）為 450 nm，洗脫程序如下表，走樣時(shí)間 60 min，設(shè)置完畢保存方法組。
2. 進(jìn)樣前，需要用初始流動(dòng)相平衡柱子，采用初始流動(dòng)相（流動(dòng)相A：流動(dòng)相B=90:10）比例平衡色譜柱30 min或更久，待基線穩(wěn)定后開始進(jìn)樣。
2.1 自動(dòng)衍生（進(jìn)樣程序的設(shè)定）：吸取氨基酸標(biāo)準(zhǔn)溶液1 μL、2 μL衍生試劑（提前過好0.22 μm有機(jī)相膜）、2 μL試劑三（提前過好0.22 μm水相膜），空氣中最大混合速度混合5次，等待1 min，進(jìn)樣。
2.2 若色譜儀沒有自動(dòng)衍生功能，可選用手動(dòng)衍生操作：吸取氨基酸標(biāo)準(zhǔn)溶液100 μL加入200 μL衍生試劑和200 μL的試劑三，渦旋5次，每次30 s，靜置1 min后過0.22 μm有機(jī)相膜，上樣。
3. 實(shí)驗(yàn)需要同時(shí)做空白對照：即用等量0.1M HCl重復(fù)上述步驟，以排除干擾。
檢測結(jié)果示例
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